細胞名稱 人成骨肉瘤細胞;Saos-2操作步驟
形態特性 上皮樣;多角形
生長特性 貼壁生長
特征特性 該細胞是Fogh J和Trempe G分離和鑒定的眾多人類腫瘤細胞系中的一種;該細胞來自一位11歲的白人女性的骨肉瘤組織?;颊呓涍^放療以及氨甲喋呤、阿霉素、長春新堿、環磷酰胺和 aramycin-C等多種藥物治療。該細胞在免疫抑制小鼠中不致瘤,細胞表達表皮生長因子EGF受體、轉化生長因子β(1型和2型)受體。
培養條件 McCoy's 5A Media (Modified with Tricine) 15%FBS
傳代方法 1:2~1:4傳代;每周1~2次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:10;D13S317:12,13;D16S539:12,13;D18S51:15;D19S433:13;D21S11:28,30;D2S1338:18;D3S1358:14,18;D5S818:12;D7S820:8,10;D8S1179:10,12;FGA:22,25;TH01:6,9;TPOX:8;vWA:18;
同工酶
染色體 46~88
使用權限 A類
人成骨肉瘤細胞;Saos-2操作步驟細胞培養
1、冷凍管應如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養時, 是否應馬上去除DMSO?
除少數特別注明對DMSO 敏感之細胞外, 絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞), 在解凍之后, 應直接放入含有10-15ml新鮮培養基之培養角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養條件不同之培養基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應之細胞培養基, 若驟然使用和原先提供之培養條件不同之培養基, 細胞大都無法立即適應, 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養條件不同之血清種類?
不能。血清是細胞培養上一個極為重要的營養來源, 所以血清的種類和品質對于細胞的生長會產生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質或分子的量或內容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
人成骨肉瘤細胞;Saos-2操作步驟復蘇操作要點:
1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內*解凍,使細胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
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