中國倉鼠卵巢細胞(CHO)
細胞介紹:
1957 年從成年倉鼠的活組織切片中建立。
細胞特性:
1來源:倉鼠卵巢
2形態 :成纖維細胞樣
3含量:>1x106個/mL
4污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5規格:T25 瓶或者 1mL凍存管包裝
細胞接受后 的處理:
1)收到細胞后,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養基,添加6ml本公司附帶的*培養基。
4)如果細胞長滿(90%以上)請及時進行細胞傳代,傳代培養用6ml本公司附帶的*培養基。
接到細胞次日,請檢查細胞是否污染,若發現污染或疑似污染,請及時與我們取得。
中國倉鼠卵巢細胞(CHO)細胞用途:僅供科研使用。
細胞培養步驟:
一. 培養基及培養凍存條件準備:
1)DMEM 培養基(GIBCO,貨號 12800017,添加 NaHCO3 1.5g/L),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%*培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
二. 細胞 處理 :
1) 復蘇細胞:將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml 培養基,培養過夜)。第二天換液并
檢查細胞密度。
2) 細胞傳代:如果細胞密度達 80%-90%,即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2. 加 2ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于 37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按 6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM 條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
3)細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基后加入少量*,細胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進行凍存。
中國倉鼠卵巢細胞(CHO)注意事項:
1. 收到細胞后,若發現干冰已揮發干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。