使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養按照樣品的采集與預培養按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
參數規格：
產品名稱：副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Haemophilus paragallinarum
貨號：CP914416
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
原理:
副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，產品僅用于科研Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后，發射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收；PCR擴增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，即每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成*同步。
特點優勢：
1. 特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過TIANDZ及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到。
2. 重現性：該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證，重現性為。
3. 靈敏性：該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測，當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時，可實現對其的直接檢測，無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測，整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1：序列資源豐富，除TIANDZ公布的序列外，公司還進行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優勢2：該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證，確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
熒光定量PCR實驗步驟：
①產品僅用于科研取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒的相關產品：
Methyl 4-hydroxybenzoate尼泊金酯25克GR，99.5%
Methyl 4-aminobenzoate4-基酯25克BR，
Methyl 4-(aminomethyl)benzoate hydrochloride4-(基基)酯鹽鹽25克BR，1M四溶液
meso-2,3-Dibromosuccinic2,3-二溴二0.5毫升BR
Mesityl oxide基異100毫升BR，
MES sodium salt鹽500克BR
MES500克IND
Merrifield resin基樹脂10克BR
Mepiquat chloride助壯素1克高純，99%
Menthone1-基-4-異基環已-[3]25克BR
Menthol（-）-薄荷醇25克CP，70%
MEMO3-(異酰氧)基三氧基硅1公斤高純，99%
MelibioseD(+)-密二糖一水1毫克高純，
MEHQ對羥基醚5克特純，99%
Meglumine葡5毫克高純，
20(R)-人參皂苷RH2 英文名稱：20(R)-Ginsenoside Rh2 號： 112246-15-8 規格：20mg
原人參二醇 英文名稱：Protopanaxdiol 號：30636-90-9 規格：20mg
原人參三醇 英文名稱：Protopanaxatriol 號：34080-08-5 規格：20mg
25-甲氧基-原人參三醇 英文名稱：25-OCH3-Protopanaxtiol 號： 規格：10mg
肉豆蔻木脂素 英文名稱：Myrislignan 號：171485-39-5 規格：20mg
肉豆蔻 英文名稱：Myristic acid 號：544-63-8 規格：20mg
染料木素 英文名稱：Genistein 號：446-72-0 規格：20mg
染料木苷 英文名稱：Genistin 號：529-59-9 規格：20mg
升麻素苷 英文名稱：Prim-O-glucosylcimifugin 號：80681-45-4 規格：20mg
升麻素 英文名稱：Cimifugin 號：37921-38-3 規格：20mg
副雞嗜血桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒Alkene 鹽酸地芬尼多雜質（烯化合物)（標準品） 規格：純度大于97%含量84.0-102%,USP30
N-Mehylparoxeine N-甲基帕羅西汀（標準品） 規格：純度大于98%
Sevoflurane 七氟烷（標準品） 規格：純度大于98%
Diaveridine 二甲氧芐啶（標準品） 規格：純度大于98%,BR
Mesanolone 美雄諾龍（標準品） 規格：純度大于98%,BR，一水物
SodiumAminosalicylaDihydra 對氨基水楊酸鈉（標準品） 規格：純度大于98%,USPgrade
MehylhioniniumChloriderihydra 亞甲藍（標準品） 規格：純度大于98.5%,BR
WarfarinSodium 華法林鈉（標準品） 規格：純度大于99%,R構型
WarfarinSodium 華法林鈉 規格：催化劑載體,8-16目
Lomusine 洛莫司?。藴势罚∫幐瘢捍笥?8%，化學純
FluphenazineDecanoa 癸氟奮乃靜（標準品） 規格：單酯含量大于40%
DobuamineHydrochloride 鹽酸多巴酚丁胺（標準品） 規格：蛋白含量≥90%,BR
5,5-Diphenylhydanoin 苯妥英（標準品） 規格：滴定法≥98%，標準品
Adamanane 金剛烷（標準品） 規格：滴定法≥99%，標準品
PropafenoneHydrochloride 鹽酸普羅帕酮（標準品） 規格：電鍍脫色,200目,fromwood
