ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
產品名稱 | cGMP人環磷酸鳥苷ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Cyclic guanosine monophosphate, cGMP Elisa Kit |
貨號 | FS-H63774 |
公司“質量是企業是生命之源”,選購優勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Psychrobacr│alimentarius 消化嗜冷桿菌Psychrobacr│alimentarius分離基物:沉積物/深海沉積物凍干物安全等級:1模式菌株:no無機污染物抗性菌/抗重金屬鉻(Cr)471生長條件:4℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Citricoccus│sp. 檸檬球菌Citricoccus│sp.分離基物:樣/海斜面培養物安全等級:1模式菌株:no大洋細菌471生長條件:4℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Planococcus│sp. 動性球菌Planococcus│sp.分離基物:沉積物/深海沉積物凍干物模式菌株:no大洋細菌471生長條件:4-20℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Salinibacrium│amurskyense 阿穆斯基灣鹽桿菌Salinibacrium│amurskyense分離基物:沉積物/深海沉積物凍干物模式菌株:no大洋細菌,產酶微生物/ 蛋白酶471生長條件:4-20℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
nacibaculum│aiptasiae 海葵黏著桿菌nacibaculum│aiptasiae分離基物:生物樣/海葵(患病的)凍干物安全等級:1模式菌株:;471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Roseobacr│litoralis 海濱玫瑰桿菌Roseobacr│litoralis分離基物:不詳斜面培養物安全等級:1模式菌株:471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Oleispira│lenta 緩慢油螺旋菌Oleispira│lenta分離基物:樣/海凍干物模式菌株:;471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Roseivivax│halotolerans 玫瑰色鮮艷菌(加詞待譯)Roseivivax│halotolerans分離基物:生物樣/附生植物凍干物安全等級:1模式菌株:;生物轉化微生物/含有細菌葉綠素;產酶微生物/產脲酶(Urease)471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
cGMP人環磷酸鳥苷ELISA試劑盒實驗原理Phospho-SHIP2 (Ser576) 磷化蛋白酪氨磷酶2抗體淀樣肽前體蛋白抗體(C端)4-(溴甲基)甲甲酯Mouse ATXN1 (Ataxin 1) ELISA Kit
Phospho-SHIP2 (Tyr542) 磷化蛋白酪氨磷酶2抗體腺苷環化酶2抗體4-(溴甲基)甲甲酯Mouse ATXN2 (Ataxin 2) ELISA Kit
Phospho-SHIP2 (Tyr986/987) 磷化蛋白酪氨磷酶2抗體載脂蛋白C3抗體N(e)-Boc-L-賴氨Mouse ABCA1 (ATP Binding Cassette Transporter A1) ELISA Kit
Phospho-SHIP2 (Tyr580) 磷化蛋白酪氨磷酶2抗體載脂蛋白E4抗體N(e)-Boc-L-賴氨Mouse ABCG1 (ATP Binding Cassette Transporter G1) ELISA Kit
SIAH1 泛素連接酶Siah1抗體自噬相關基因AMBRA1抗體N(e)-Boc-L-賴氨Mouse ANP (Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit
SIAH2 泛素連接酶Siah2磷化自噬相關蛋白4C抗體3,3',4,4'-聯苯四甲二酐Mouse AXIN2 (Axis Inhibition Protein 2) ELISA Kit
SIP1 運動神經元存活蛋白結合蛋白1抗體磷化自噬相關蛋白4C抗體3,3',4,4'-聯苯四甲二酐Mouse bFGF/FGF2 (Basic Fibroblast Growth Factor) ELISA Kit
SIRT1 沉默調節蛋白1抗體磷化凋亡信號調節激酶1抗體3,3',4,4'-聯苯四甲二酐Mouse FGF4 (Fibroblast Growth Factor 4) ELISA Kit
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準