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  • 脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法

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  • 品牌其他品牌
  • 所在地上海市
  • 更新時間2022-04-24
  • 廠商性質經銷商
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  • 產品數量8980
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公司主推品牌: (進口、國產) Amresco 、Sigma、 Peprotech 、Corning 、BD Faclon 、Axygen、 Invitrogen、 Qiagen、 Hyclone 、Uscnlife、 Wako 、SantaCruz、sciencell、Gibco、R&D、Linco、Amersham、Millipore。





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貨號GOY-01S6397
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脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法 產品詳情

【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法

100管/96樣

微量法

GOY-01S6397

商品介紹

測定意義

DHAR存在于細胞質、線粒體和葉綠體中。DHAR催化GSH還原DHA生成AsAGSSG,調控細胞AsA/DHA比值,是抗壞血酸-氧化還原循環的關鍵酶。提高植物體內的 DHAR 活性,可提高植物食品中AsA含量,進而提高植物食品的營養品質。

測定原理:

DHAR催化GSH還原DHA生成AsA,通過測定DHA減少速率,計算DHAR活性。

實驗中所需儀器及設備:

研缽、冰、低溫離心機、紫外分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、可調式移液器和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
QQ截圖20220307153443.png

所需的儀器和用品:

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:

建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗

樣本和試劑浪費!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取

② 細菌/細胞樣本:

先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。

注意事項:

1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時在冰上放置。

2、對照管只需要做一管。

3、若對照管吸光值大于 1,建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用(10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水)。

4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數值在什么范圍?對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現配現用;

2)沒有按順序加試劑;(3)反應時間不夠,可以延長反應時間(反應時間 30min可以延長到 40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。

若出現測定管大于對照管,可能是樣本中雜質的影響太大,為了降低雜質的影響一般

將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測,通常可以使測定正常。

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脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)微量法氣相色譜儀檢定用標準物質(-溶液)5.03mg/ml,體:泛素結合UFC1抗體

五日生化需氧量標準品1000mg/L泛素結合E2J1抗體

水質生化需氧量標樣 濃度范圍:61.8-148(mg/L),分析標準品輔色素C還原核心蛋白1抗體

(b)熒蒽標準溶液 10~100μg/mL,體:核蛋白95抗體

(k)熒蒽標準溶液 4.38ug/ml,體:泛素結合E2變異體1抗體

標準溶液 1.00mg/ml,體:石油泛素結合E2蛋白A抗體

標準溶液 1.00mg/mL,體:乙-水泛素結合E2O抗體

溴標準溶液 100µg/mL泛素蛋白連接J2抗體

純度分析標準物質 99.95%泛素蛋白連接M抗體

氣相色譜\質譜聯用儀校準用標準物質(異辛烷中二酮溶液) 10.0泛素蛋白連接W抗體

鄰二丁芐酯標準溶液 165.0μg/mL,溶劑:同源蛋白UNCX抗體

1,1,2,2-四乙烷標準溶液0.92mg/ml,溶劑:UL16結合蛋白3抗體

銅標準溶液 100ug/mL(20degree),體:1%HNO3去泛素化22抗體

膽固 分析標準品,99.0%RNA聚合I抗體

標準溶液 0.117mg/ml,體:異辛烷尿鹽重吸收轉運子1抗體

測定步驟:

1、 酶標儀預熱30min以上,調節波長至450nm。

2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。

3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)

4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內用完)。

5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)

選擇抗凝的注意點:

①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;

②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;

③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);

④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。

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