使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩轉株的工作濃度需要根據細胞類型,培養基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應曲線)來實現,至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養板上,37℃,CO2培養過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據細胞類型,設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養基,換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(通常是7-10天)內能夠殺死絕大多數細胞的濃度為穩定轉染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養板,繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
公司產品具有質量可靠、效果穩定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產品名稱:苯唑西林溶液說明書
貨號:BJ-01R3236
規格:10ml
分類:抗生素
儲存條件:—20℃,避光,12個月
用途:苯唑西林(Oxacillin)是一種類抗生素,為耐酶,其抗菌作用方式與相仿。苯唑西林對產酶葡萄球菌具有良好抗菌活性,對各種鏈球菌及不產酶的葡萄球菌抗菌活性則遜于G。苯唑西林通過抑制細菌細胞壁合成而發揮殺菌作用。苯唑西林時常被用于分子生物學實驗研究中,如用于配制含苯唑西林的LB培養基或LB平板等。一般工作濃度為0.4~6.4μg/ml,主要用于抗酶葡萄球菌的培養。
注意事項:經無菌處理。注意無菌操作。
注意事項:
1、盡注意無菌操作,避免污染。
2、避免反復凍融。
3、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
標準溶液的配制:
1.直接配制法 對于純凈的物質(稱做基準物質)可準確進行稱量,用蒸餾水溶解后,轉移到一定容積的容量瓶中稀釋至標線,溶液的準確濃度可以直接計算出來。溶質的純度、性質等對濃度有較大影響,為此,對用來直接配制標準溶液用的基準物質必須具備以下條件:
(1)物質的純度要高,含量不得低于99.9%,雜質的含量應當少到可以忽略的程度。
(2)物質的分子組成應與其化學式*符合,包括結水合物中的結品水含量也必須與其化學式相符合。如硼砂Na2B4O7·10H2O等。
(3)性質穩定,貯蔵時應不發生變化,不易吸收空氣中的水分、二氧化碳等氣體而改變其成分,不易風化潮解和被空氣氧化,烘干時不易分解等。此外最好使用分子量較大的基準物質以減小稱量誤差。
2.間接配制法 凡不符合基準物質條件的物質,可先配制成近似所需濃度的溶液,再用基準物質溶液或能與其發生定量反應的標準溶液進行滴定,求其準確濃度,這種通過滴定來確定準確濃度的操作叫做“標定”。間接法配制近似濃度溶液時不需用分析天平稱量和容量瓶配制,可用臺秤、量筒等器皿。將稱好的物質轉移到干凈的試劑瓶中,先加少量蒸餾水將其溶解,繼續用量筒加蒸餾水至需要量即可。由于大多數試劑不符合基準物的條件,故間接法配制標準溶液是經常的。如固體NaOH因易吸收空氣中的水分而潮解和吸收CO2使表面變質;濃鹽酸因易揮發而無法準確稱量;不易得到分析純級的試劑等,這些物質的標準溶液須用間接法來配制,經標定后再做標準溶液使用。
標準溶液的標定:
1.用基準物質標定法
(1)多次稱量法 用減重法精密稱取幾份(如2~3份)基準物質,分別倒入編號的干凈錐形瓶(或燒杯)內,各加少量蒸餾水溶解,再加指示劑后分別用待標定溶液滴定至等當點,各自記錄所消耗待標定溶液的體積,結合基準物質的重量分別算出溶液的準確濃度,最后取平均值做為標準溶液的濃度。
(2)移液管法 精密稱取一份基準物質,在干凈的小燒杯內加少量蒸餾水溶解,順玻棒全部轉移到已校正好的容量瓶中,多次沖洗燒杯洗液并入容量瓶中,最后配成一定體積的溶液,混勻。每次滴定用配套的移液管吸取并轉移至錐形瓶中,加指示劑后用待標定溶液滴定至等當點,每次做好記錄,根據所消耗待標定溶液的體積,結合基準物質的重量,分別算出溶液的準確濃度取平均值做為標準溶液的濃度。
2.比較法標定 如果待標定溶液能與某標準溶液進行反應,可吸量一定體積的某標準溶液,用待標定溶液滴定,或吸量一定體積的待標定溶液,用某標準溶液滴定。根據兩溶液所消耗的毫升數及某標準溶液的濃度,按N1V1=N2V2式可以計算出待標定溶液的準確濃度。這種用標準落液來測定待標定溶液準確濃度的過程稱為“比較法”標定。如果某標準溶液的濃度由于某些原因不夠準確時,就會直接影響待標定溶液濃度的準確性,顯然比較法不如用基準物質直接標定的方法精確,但比較法簡便易行。
標定完畢,蓋緊標準溶液試劑瓶塞,瓶簽上注明標準溶液名稱、準確濃度和日期等。
Trichinella papuae巴布亞旋毛蟲LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周SBP1/Selenium Binding Protein 1 結合蛋白1抗體 規格: 0.2mlCD83/HB15 CD83抗體 規格: 0.2ml
Rabbit Hemorrhagic Disease Virus(RHDV)兔出血癥病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Rabbit Anti-mouse IgG-Fc/Cy7 Cy7標記的兔抗小鼠IgG-Fc 規格: 0.1mlMouse Anti-human IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標記的小鼠抗人IgM 規格: 0.1ml
Radix rehmanniae 地黃LAMP鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周Tubulin-alpha 微管蛋白α抗體 Tubulin α 規格: 0.1mlCCDC37 卷曲螺旋結構域蛋白37抗體 規格: 0.2ml
Feline Herpes Virus貓庖疹病毒LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周FMNL1 成蛋白相關蛋白1抗體 規格: 0.2mlMFAP1 微原纖維膠原相關蛋白1抗體 規格: 0.2ml
Lawsonia spp.勞森通用探針法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ESM1 內皮細胞特異性分子1抗體 規格: 0.1mlFerritin Light Chain 鐵蛋白輕鏈抗體 規格: 0.1ml
Cochliomyia hominivorax嗜人錐蠅染料法熒光定量PCR試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周MMP9 基質金屬蛋白9抗體 0.1mlC1orf129 1號染色體開放閱讀框129抗體 規格: 0.2ml
甲型流感()H5/H7/H9亞型三重RT-PCR試劑盒 定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周CYP11A1/P450SCC P450 11A1抗體 規格: 0.1mlCCDC148 卷曲螺旋結構域蛋白148抗體 規格: 0.2ml
Corynebacterium minutissimum極小棒桿LAMP試劑盒 動物病原微生物檢測(科研用)/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周ATG8/GABARAPL2 G1氨基丁酸A型受體相似蛋白2抗體 規格: 0.2mlSLC40A1/FPN1 細胞膜鐵轉運蛋白FP1抗體 規格: 0.1ml
兔源性成分PCR檢測試劑盒 種源性檢測/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgM 規格: 0.1mlBNP 腦鈉素/利鈉肽抗體 規格: 0.2ml
Semen arecae檳榔染料法PCR鑒定試劑盒 中藥材鑒定試劑盒/定做種屬檢測試劑盒 50次 低溫 負20度 一年 2-4周C2orf24 2號染色體開放閱讀框24抗體 規格: 0.2mlPerilipin A+B 脂滴包被蛋白A+B抗體 規格: 0.2ml
苯唑西林溶液說明書phospho-Pyk2 (Tyr881) 磷酸化富含脯的酪激2抗體 規格: 0.1ml
Phospho-CD19(Tyr531) 磷酸化CD19抗體 規格: 0.1ml
Rabbit Anti-Bov IgG/Cy5.5 Cy5.5標記的兔抗牛IgG 規格: 0.1ml
Polycystin 2 多囊蛋白2抗體 規格: 0.2ml
HDAC6 組蛋白去乙酰化6抗體 規格: 0.1ml
BAG5 BCL2分子伴侶調節蛋白5抗體 規格: 0.2ml
phospho-SYN1(Ser62+Ser67) 磷酸化神經突觸素1抗體 0.1ml
Goat Anti-human IgM/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗人IgM 規格: 0.1ml
Corin 心臟特異性絲蛋白抗體 規格: 0.2ml
hHb(H5A3) 人紅蛋白單克隆抗體 規格: 0.2ml
KAT13D/CLOCK 生物鐘KAT13D蛋白抗體 規格: 0.2ml
FGF19 成纖維細胞生因子19抗體 規格: 0.2ml