實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
產品名稱 | 英文名稱 | 規格 | 貨號 |
馬立克氏病病毒型PCR熒光定量檢測試劑盒 | Marek's Disease Virus(MDV)3PCR | 多種規格 | BJ-P6963 |
實驗外包:
1.基因組學:基因芯片、SNP檢測、DNA甲基化檢測、生物信息學分析
2.轉錄組學:microRNA芯片、LncRNA芯片、表達譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質組學:2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測:DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質檢測:Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測:HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細胞分選
7.代謝組學:GC-MS、LC-MS、NMR
8.細胞及動物模型:原代細胞、細胞模型、動物模型構建
特點優勢:
1. 特異性:所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析,經過GenBank及自建龐大數據庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段,可實現對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現性:該系列所有產品均經過大量實驗菌株的驗證,重現性為100%。
3. 靈敏性:該系列產品可實現對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現對臨床樣品及其他環境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優勢2:該系列試劑盒均經過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現任何的假陽性及假陰性報告結果。
二、操作步驟 1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。 3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。 | 三、注意事項 1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。設立一個專用的PCR實驗室。 2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結果,純化的方法越簡單越好。 3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。 4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。 5.試劑都應該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續性。 6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。 7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻。
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操作流程
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作,各區實驗服、儀器 、耗材應獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區應配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設置陰、陽性對照。
4. 所有試劑在使用應該在常溫下充分融化混勻,并應瞬時離心。
5. 試劑盒內所配陰性和陽性對照在一次使用應全部轉移至標本準備區,并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾,應避免裸手直接接觸PCR反應管,并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置;不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
20次 Southern Marker Oligo(DIG) 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Serum amyloid P-component
500mL Blotto-Tween in TBS with azide Blotto-Tween in TBS with azide 常溫保存 15.6-1000 pg/mL 血栓素B2(Thromboxane B2)ELISA試劑盒
1瓶 QGY-7703株 QGY-7703 低溫運輸和保存蛋白胨E進口、國產Gelatin Peptone250克BR
250g D- D-Mannitol 室溫干燥保存 78-5000 pg/mL 人D結合蛋白(DBP)ELISA試劑盒
2 ug pIRES-puro pIRES-puro 低溫運輸,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human D-aspartate oxidase
50次 柱式RNA純化試劑盒 Column RNAclean-Up 常溫保存,RNA洗脫液需要-20℃保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human 5-hydroxytryptamine receptor 1B
1mL 植物蛋白抑制劑 Protease Inhibitor for Plant -20℃保存 3.9-250 ng/mL ELISA Kit for Human Apolipoprotein(a)
紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基(顆粒) 250g 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Protein-arginine deiminase type-2
25g N-2- -N’-2- 乙基磺酸鈉 HEPES,Sodium Salt 室溫保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase FKBP5
150 U 限制性內切NotI Restriction Endonuclease -20℃保存察氏培養基進口、國產Czapek Dox Agar250克用于酵母菌的培養
2 ug pTALETF_v2 (NI) pTALETF_v2 (NI) 低溫運輸,-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人苗條素受體(LR/Ob-R)ELISA試劑盒
馬立克氏病病毒型PCR熒光定量檢測試劑盒Chaetocin 組蛋白甲基轉移酶(HMT)SU(VAR)3-9抑制劑(Chaetocin) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
Pluripotin RSK2抑制劑(Pluripotin) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
IN GTPase Cdc42抑制劑(IN) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg
PHT-427 Akt和PDPK1雙重抑制劑(PHT-427) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
AG1024 IGF-1R自磷酸化抑制劑(AG1024) 1mL(10mM)|5mg|10mg
PF-543 Citrate SPHK1抑制劑(PF-543 Citrate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
TG003 Clk1/Sty抑制劑(TG003) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
DMH-1 BMP抑制劑(DMH-1) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg
MI-773 MDM2-p53相互作用抑制劑(MI-773) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
LEE011 hydrochloride CDK抑制劑(LEE011 hydrochloride) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
AZD 6482 PI3Kβ抑制劑(AZD 6482) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg