組成及試劑配制:
1、酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
服務流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
登革病毒4型檢測試劑盒（熒光PCR法） | 50T | YS-P013983 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術(shù)概論。
反應五要素：
參加PCR反應的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。
雞激肽釋放酶6(KLK6) PE-Cy3標記的小鼠抗人IgM
雞凋亡蛋白酶激活因子1(APAF-1) PE-CY5標記的小鼠抗人IgM
雞視網(wǎng)膜母瘤蛋白1(RB1) APC標記的小鼠抗人IgM
雞心肌鈣黏蛋白(H-Cadherin) Alexa Fluor 350標記的小鼠抗人IgM
雞色素P450家族成員26A1(CYP26A1) Alexa Fluor 488標記的小鼠抗人IgM
雞脂筏特征蛋白2(FLOT2) Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgM
雞抗心磷脂抗體IgG(ACA-IgG) Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgM
雞色素P450家族成員24A1(CYP24A1) PE-Cy5.5標記的小鼠抗人IgM
雞狀腺素抗體(TAb)PE-Cy7標記的小鼠抗人IgM
雞凝血因子XI(F11) 堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗人IgM
雞質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)膠體金標記的小鼠抗人IgM
雞纖維蛋白原(FBG)Cy7標記的小鼠抗人IgM
雞3-羥-3-戊二酰輔酶A合酶1(HMGCS1) PE標記的小鼠抗人IgM
雞胱天蛋白酶7(P7) 羅丹明標記的小鼠抗羊IgG
雞蛋白17(Sp17)膠體金標記的小鼠抗羊IgG
雞補體因子B(CFB) 堿性磷酸酶（AP）標記的小鼠抗羊IgG
登革病毒4型檢測試劑盒（熒光PCR法）VEGF/FITC 熒光素標記VEGF抗體IgGFMOC-肌氨酸 98%
VEGF(Rabbit)/FITC 熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子抗體IgGN-FMOC-L-1,2,3,4-四羥異喹啉-3-酸 97%
VEGF-A/FITC 熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子A抗體IgGFMOC-N--L-氨酸 97%
VEGF-B/FITC 熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子B抗體IgGFmoc-N--L-天冬氨酸 4-叔丁酯 98%
VEGF-C/FITC 熒光素標記血管內(nèi)皮生長因子C型抗體IgGFmoc-N--L-谷氨酸 5-叔丁酯 98%
VEGF-D/FIGF/FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠血管內(nèi)皮生長因子D型VEGFD抗體IgGFmoc-N--L-異亮氨酸 98%
VEGF/RBITC 羅丹明標記VEGF抗體IgGFmoc-N--L-亮氨酸 99%
Mouse human VEGF/FITC 熒光素標記小鼠抗人VEGF單克隆抗體IgGN-Fmoc-N--O-叔丁-L-絲氨酸 98%
