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【友情提示】：本產品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失，請仔細閱讀購買說明！
| 產品名稱 | 規格 | 檢測方法 | 貨號 |
| 輔酶ⅠNAD(H)含量微量法檢測試劑盒 | 100管/48樣 | 微量法 | GOY-01S6321 |
商品介紹
| 測定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環（TCA）的主要氫受體，生成的NADH經呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時，形成大量的ROS，同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環。另外，NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。 測定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進一步采用MTT還原法檢測。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；
試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
所需的儀器和用品：
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗
樣本和試劑浪費！
1、樣本制備
① 組織樣本：
取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。
【注】：若增加樣本量，可按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本：
先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液，超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復 30 次）；
12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
【注】：若增加樣本量，可按照細菌/細胞數量（10
4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。
注意事項：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于 1，建議將試劑二用蒸餾水稀釋 7 倍后使用（10μL 試劑二原液+60μL蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數值在什么范圍？對照管的范圍是 0.4-1。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現配現用；
（2)沒有按順序加試劑；（3）反應時間不夠，可以延長反應時間（反應時間 30min可以延長到 40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應倍數。
若出現測定管大于對照管，可能是樣本中雜質的影響太大，為了降低雜質的影響一般
將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋 10倍后再測，通常可以使測定正常。
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血管內皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ELISA Kit for Protein C Receptor, Endothelial (PROCR) 48T/96T Mus musculus (Mouse)
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測定步驟：
1、 酶標儀預熱30min以上，調節波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋：將試劑三用蒸餾水稀釋50倍，用多少配多少。（試劑三和蒸餾水1：49稀釋。
3、 工作液配制：在試劑一加入100μl試劑二，充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。（若一次性測定樣本較少，可按照實際用量將試劑一和試劑二按照20ml：0.1ml的比例混勻配制）
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解（溶解后一周內用完）。
5、 樣本測定（在96孔板中依次加入下列試劑）
選擇抗凝的注意點：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時可能會出現絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后用于測定。
