昆蟲桿狀病毒表達質粒 pFastBac1-C-EGFP，全稱為pFastBac1-PreScission-C-EGFP-His-tag-Strep-tag，以pFastBac1為基礎構建的用于昆蟲細胞表達目的蛋白C端融合有EGFP蛋白的質粒。本質粒含有polyhedrin (PH)啟動子，可以高效啟動目的蛋白和EGFP融合蛋白在昆蟲細胞(如Sf9和Sf21等)中的表達，其表達的EGFP有很強的綠色熒光，在顯微鏡下可以非常方便地觀察目的蛋白的表達情況。同時EGFP的C端含有編碼8×His標簽的序列和編碼短肽親和標簽Strep-tag II的序列，因此可以非常便捷地使用鎳柱或Strep-Tactin系統進行分離純化。同時在目的蛋白和EGFP之間含有PreScission酶切位點，便于后續酶切去除標簽。

和EGFP融合表達，便于觀察表達水平。采用Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統表達目的蛋白時，通常僅僅是根據細胞被桿狀病毒感染的外部形態來判斷目的蛋白的表達情況，因此很容易出現收集病毒時間過早或過晚而導致的目的蛋白表達水平偏低或活性下降的問題。將目的蛋白構建成EGFP的融合表達蛋白，因為后者有很強的綠色熒光，在熒光顯微鏡下可以非常方便地觀察目的蛋白的表達效果從而可以有效避免上述問題的發生。

His和Strep-tag II雙標簽系統，便于分離純化。pFastBac1-C-EGFP表達的目的蛋白EGFP融合蛋白的C端含有編碼8×His標簽的序列，因此可以非常便捷地使用鎳柱進行分離純化，也可以使用His標簽抗體來識別目的蛋白融合蛋白的表達。同時，本質粒表達的目的蛋白EGFP融合蛋白的C端還含有短肽親和標簽Strep-tag II的序列。Strep-tag II是由8個氨基酸(WSHPQFEK)構成的短肽序列，在生理條件下可通過Strep-Tactin純化介質高選擇性地對Strep-tag II融合蛋白進行親和純化，該標簽的純化條件比較溫和，能很好地保持目的蛋白的生物活性，并僅通過一步親和層析后就有可能獲得超過99%純度的目的蛋白。

帶有PreScission位點，便于去除標簽。本質粒表達的融合蛋白，在目的蛋白和EGFP蛋白之間有PreScission蛋白酶識別的八肽序列LEVLFQGP，因此在目的蛋白純化后或純化的同時可以利用PreScission蛋白酶切除目的蛋白C端的EGFP蛋白、8×His標簽以及Strep-tag II標簽。PreScission蛋白酶酶切發生在八肽序列的Q和G之間，如果目的蛋白基因是通過無縫克隆的方法以理想的方式克隆在PreScission酶切位點之后，那么目的蛋白的N端可以只留下兩個額外的氨基酸殘基GP。

pFastBac1-C-EGFP是基于Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而設計的表達載體。Bac-to-Bac桿狀病毒表達系統是由Luckow等人于1993年發展的一種快速而有效產生重組桿狀病毒的方法。該系統主要包括以下兩個組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因如EGFP等插入后受桿狀病毒特異性啟動子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin啟動子調控表達；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質粒(helper plasmid，用于表達轉座必須的轉座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。將pFastBac重組質粒轉化該菌株可發生pFastBac重組質粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發生轉座，從而形成重組的bacmid。位點特異的轉座會破壞宿主的lacZα基因，從而可通過藍白斑篩選重組克隆。PCR等方法鑒定重組克隆后，提取重組的bacmid轉染昆蟲細胞，可以產生重組桿狀病毒，并表達目的蛋白和融合蛋白。擴增重組的桿狀病毒并感染昆蟲細胞，就可以大量表達純化目的蛋白了。

昆蟲桿狀病毒表達質粒為氨芐青霉su抗性。

pFastBac1-C-EGFP質粒的主要信息如下：

pFastBac1-C-EGFP質粒(5517bp)的圖譜如下：

pFastBac1-C-EGFP中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-C-EGFP)包括：

pFastBac1-C-EGFP中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pFastBac1-C-EGFP)包括：

pFastBac1-C-EGFP質粒可使用的測序引物序列如下：

pFastbac-F primer (3995-4014): 5'-TAT TCC GGA TTA TTC ATA CC-3'

pFastBac-R primer (4909-4927): 5' -ACA AAT GTG GTA TGG CTG A-3'

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