天根試劑盒- 高效植物基因組

產(chǎn)品介紹

天根試劑盒-高效植物基因組 采用可以DNA的離心吸附柱自配的裂解緩沖液系統(tǒng)，能夠高效提取多種不同植物組織中的基因組DNA。離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司新型材料， 高效吸附DNA，可有效去除雜質(zhì)蛋白。配套的裂解緩沖液可以高效裂解植物細(xì)胞，保護(hù)DNA的完整性，提高基因組DNA濃度。提取的基因組DNA片段大，純度得率高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。

使用本試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫(kù)構(gòu)建、 Southern等實(shí)驗(yàn)。

儲(chǔ)存條件

 試劑置于室溫（15-30℃）干燥條件下可保存12個(gè)月；更長(zhǎng)時(shí)間的保存可置于2-8℃。

使用中若產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)先將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫中放置一段時(shí)間，必要 時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀。

 產(chǎn)品特點(diǎn)

• 簡(jiǎn)單快速：1 h內(nèi)即可獲得高質(zhì)量的基因組DNA。
•  廣 泛：適用于各種植物組織。
•  高 純 度：獲得的DNA可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

請(qǐng)務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。

 1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量也下降。

 2．緩沖液FGA可能發(fā)黃，并不影響提取效果。

 3．若緩沖液FGA或LP2有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

 4．所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)，室溫下離心。

天根試劑盒-高效植物基因組說(shuō)明書(shū)

使用前請(qǐng)先在緩沖液LP3和漂洗液PW中加入無(wú)水乙醇，加入體積請(qǐng)參照瓶上的標(biāo)簽。 

1. 處理材料： 取植物新鮮組織100 mg或干重組織20 mg，加入液氮充分碾磨。加入400 μl緩沖液FGA和 6 μl RNase A（10 mg/ml），旋渦振蕩1 min，室溫放置10 min。

 2. 加入130 μl緩沖液LP2，充分混勻，旋渦振蕩1 min。

 3. 12,000 rpm（~13,400×g）離心5 min，將上清移至新的離心管中。

 4. 加入1.5倍體積的緩沖液LP3(例如500 μl的濾液加750 μl緩沖液LP3) (使用前請(qǐng)先檢查是否 已加入無(wú)水乙醇)，立即充分振蕩混勻15 sec，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀。

 5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CB3中（吸附柱放入收集管中）， 12,000 rpm（~13,400×g）離心30 sec，倒掉廢液，吸附柱CB3放入收集管中。

 6. 向吸附柱CB3中加入600 μl 漂洗液PW (使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。 

注意：如果吸附柱膜呈現(xiàn)綠色，向吸附柱CB3中加入500 μl無(wú)水乙醇，12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉廢液，將吸附柱CB3放入收集管中。

7. 重復(fù)操作步驟6.

 8. 將吸附柱CB3放回收集管中，12,000 rpm (~13,400×g) 離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱 CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以晾干吸附材料中殘余的漂洗液。 

注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù) 的酶反應(yīng)(酶切、PCR等)實(shí)驗(yàn)。

9. 將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200 μl洗脫緩 沖液TB，室溫放置2-5 min，12,000 rpm（~13,400×g）離心2 min，將溶液收集到離心 管中。 注意：為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室溫放置2 min，12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min。洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50 μl，體積過(guò)小 影響回收效率。

洗脫液的pH值對(duì)于洗脫效率有較大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其 pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防 DNA降解。 

DNA濃度及純度檢測(cè) 得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過(guò)程中的剪切力等因素有關(guān)。

回收 得到的DNA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。 

DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml 單鏈DNA。

 OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會(huì)偏 低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。