h460細(xì)胞株

細(xì)胞名稱：人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞（STR鑒定正確）

細(xì)胞別稱：NCI-H460細(xì)胞；NCI.H460; H460; H-460; NCIH460; NCI-HUT-460; NCI-460

細(xì)胞簡稱：h460細(xì)胞株

產(chǎn)品貨號(hào)：TCH-C286

種屬來源：人

組織來源：肺

特征：肺癌

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)體系：RPMI-1640 ＋10% FBS＋1% P/S

h460細(xì)胞株培養(yǎng)基貨號(hào)：TCH-G286

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：24-48 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO 2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測：細(xì)菌、真菌、支原體檢測均為陰性

  NCI-H460細(xì)胞是從一位大細(xì)胞肺癌者的胸水中建立的。h460細(xì)胞株表達(dá)的p53 mRNA易于檢測，其水平與正常肺細(xì)胞相當(dāng)，未表現(xiàn)出NCI-H460細(xì)胞DNA總體結(jié)構(gòu)異常。NCI-H460細(xì)胞角蛋白和波形蛋白纖維染色陽性；神經(jīng)絲三聯(lián)體蛋白陰性。

細(xì)胞培養(yǎng)操作說明

細(xì)胞的復(fù)蘇：

 1. 從液氮中取出細(xì)胞凍存管，快速將其置入37℃水浴中解凍直至凍存管中無結(jié)晶，75%的酒精擦拭凍存管外壁；

 2. 將凍存管中的細(xì)胞移至含 6ml 培養(yǎng)基的15ml 離心管中，1000rpm離心 5min；

 3. 棄上清，沉淀用 6ml 培養(yǎng)基重懸，接種25cm2 培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 

傳代： 

（1）貼壁細(xì)胞：

 1. 細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄25cm2 培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS 清洗細(xì)胞一次；

 2. 添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心5min；

3. 棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，按1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，補(bǔ)加培養(yǎng)基后放入 37℃，5%CO2 細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

（2）懸浮細(xì)胞: 待細(xì)胞達(dá)到 1x10^6/ml 左右可按照以下方法換液培養(yǎng)或傳代。

方法①：收集細(xì)胞，1000rpm 離心 5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：3 的比例分到含培養(yǎng)基的新瓶中。

方法②：豎立放置培養(yǎng)瓶，細(xì)胞沉淀后棄去上半量培養(yǎng)基，將細(xì)胞懸液按1：2 到 1：3 的比例分到含培養(yǎng)基的新瓶中。凍存： 1. 離心收集細(xì)胞并進(jìn)行計(jì)數(shù)(參考離心條件：1000rpm，5 min)。移去離心管中的上清液； 3. 加入適量的無血清細(xì)胞凍存液于離心管中，調(diào)整細(xì)胞濃度至 1~5×10 6 cells/mL。輕柔混勻，制成細(xì)胞凍存懸液；

4. 將離心管中的細(xì)胞凍存懸液分裝于已標(biāo)示的凍存管中；

5. 直接將含細(xì)胞懸液的凍存管放入-80℃冰箱，長期冷凍保存或轉(zhuǎn)入液氮?dú)庀嘀写鎯?chǔ)。可以使用一步法凍存液。