HyCyte 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)稱：H ADSC

產(chǎn)品貨號(hào)：ADHX-C106

種屬來源：人

組織來源：脂肪

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)

培養(yǎng)基貨號(hào)：ADHX-G102

傳代比例：1:3-1:6，每2-3天換液一次

傳代周期：48-72 h

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃

凍存條件：60%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO，液氮儲(chǔ)存

質(zhì)量檢測(cè)：細(xì)菌、真菌、支原體檢測(cè)均為陰性

毒素檢測(cè)：＜10 EU/mL

參考文獻(xiàn)：

Bianco P, Robey P G,Simmons P J. Mesenchymal stem cells: revisiting history , concepts, and assays[J]. Cell Stem Cell, 2008,2(4):313

Bassi G, Pacelli L, Carusone R, et ai. Adipose-derived stromal cells(ASCs)[J]. Transfus Apher Sci, 2012,47(2):193

DelaRosa O, Sanchez-Correa B, Morgado S, et al. Human adipose derived stem cells impair natural killer cell function and exhibitlow susceptibility to natural killer mediated lysis[J]. Stem Cells Dev,2012,21(8):1333

Estes B T，Diekman B O,Gimble J M, et al. Isolation of adipose derived stem cells and their induction to a chondrogenic phenotype[J]. Nat Protoc,2010,5(7):1294

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HyCyte 成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 Human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells（H ADSCs） 

貨號(hào)：ADHX-C106 

規(guī)格：1×10^6 cells/Vial |

收貨后處理方法:

 收到細(xì)胞后請(qǐng)檢查包裝是否完整，干冰是否充足，凍存管有無破損，并核對(duì)管身標(biāo)簽信息和數(shù)量， 確認(rèn)是否與裝箱單一致。如有異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。 如不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)將細(xì)胞放至-80℃或液氮中保存。 

 凍存代次： P2 培養(yǎng)體系： HyCyteTM成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基（Cat. ADHX-G101）

 換液時(shí)機(jī)： 發(fā)現(xiàn)有比較多的死細(xì)胞或培養(yǎng)基顏色較黃時(shí)，應(yīng)換液。一般為每 2-3 天換液 

傳代比例： 一般為 1:2 

傳代周期： 細(xì)胞匯合度達(dá) 80%~90%時(shí)，可進(jìn)行傳代，一般為 48~72 h，不可讓間充質(zhì)干細(xì) 胞融合或過度融合，以免發(fā)生生長(zhǎng)接觸抑制，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)。 

培養(yǎng)條件： 氣相：95%空氣+5%CO2，溫度：37℃ 

凍存條件： 使用一步凍存液 HyCyteTM One Step Freezing Medium（Cat. GUCP-R201）

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| HyCyteTM H ADSCs 的復(fù)蘇

 1) 實(shí)驗(yàn)前開啟水浴鍋預(yù)熱培養(yǎng)基。

 2) 在工作臺(tái)中準(zhǔn)備好 15 mL 離心管加入 5 mL 預(yù)熱后的培養(yǎng)基。 

3) 從-80°C 冰箱中取出凍存管，將凍存管置于 37℃水浴鍋內(nèi)，快速搖動(dòng)解凍直到內(nèi)容物融 化，同時(shí)需注意避免水面沒過管口。 

NOTE：建議將液氮中的細(xì)胞提前取出置于-80°C 待 液氮揮發(fā)后復(fù)蘇。 

4) 對(duì)凍存管外壁進(jìn)行常規(guī)消毒后，在工作臺(tái)內(nèi) 小心開蓋，盡量避免氣泡溢出，輕柔吹打數(shù)次， 轉(zhuǎn)移至 15 mL 離心管內(nèi)。使用 1 mL 培養(yǎng)基 清洗凍存管內(nèi)壁，一并收集至 15 mL 離心管 內(nèi)。 

5) 250 g 離心 5 min，收集細(xì)胞沉淀，棄掉上清 并加入 2 mL 培養(yǎng)基重懸（如有臺(tái)盼藍(lán)可 取少量進(jìn)行染色計(jì)數(shù)）。 

6) 將重懸后的細(xì)胞接種至 T25 或同等底面積器 皿，“劃十字”搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻 分布。把細(xì)胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 

7) 24h 后鏡下拍照觀察，換液后繼續(xù)培養(yǎng)。如有 異常情況，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。

| HyCyteTM H ADSCs 的傳代

 1) 預(yù)熱 1×PBS、和培養(yǎng)基。 

2) 吸去原培養(yǎng)基。用 1×PBS 洗滌細(xì)胞 2~3 次。 

3) 吸去 1×PBS。加入。輕輕旋轉(zhuǎn)，使 覆蓋細(xì)胞表面，消化，顯微鏡下觀察約 70%~80%左右的細(xì)胞變圓后，用手輕拍培養(yǎng) 器皿外壁使細(xì)胞脫壁。 

4) 當(dāng)觀察到細(xì)胞明顯脫落，立即加入預(yù)熱的培養(yǎng)基終止消化。用吸管吸取液體，反復(fù)輕 柔吹打培養(yǎng)器皿底壁，使細(xì)胞脫離器皿 底壁。 NOTE：建議可添加 2 倍用量的培養(yǎng)基用于 終止消化。 

5) 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到離心管中。用 1xPBS 清洗 底壁，收集細(xì)胞懸液至離心管中。 

6) 250 g 離心 5 min。

 7) 小心棄去上清液，加入 1~2mL 培養(yǎng)基重 懸細(xì)胞。

 8) 選擇合適的培養(yǎng)器皿，加入適量培養(yǎng)基， 按照合適的傳代比例（一般為 1:2）接種細(xì)胞， “劃十字”搖晃細(xì)胞培養(yǎng)器皿，使細(xì)胞均勻分布。

 9) 把細(xì)胞放入 37°C，5%CO2，飽和濕度的培養(yǎng) 箱中培養(yǎng)。

| HyCyte H ADSCs 的凍存 

1) 待細(xì)胞生長(zhǎng)至可傳代的匯合度，即可消化準(zhǔn)備 凍存。 

2) 消化細(xì)胞，取少量細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)。細(xì)胞懸液經(jīng) 250 g離心5 min。 

3) 小心棄掉上清。用4°C預(yù)冷的凍存液重懸細(xì)胞， 一般凍存密度為1×10^6個(gè)/mL。 

4) 對(duì)凍存管進(jìn)行標(biāo)識(shí)后，把細(xì)胞分裝到凍存管中， 旋緊凍存管蓋。 

5) 如使用HyCyte使用一步凍存液，凍存管直接 豎直放入-80°C冰箱即可。 如使用程序凍存液，需將凍存管放入程序降溫 盒后方可放入-80°C冰箱。 

6) 24小時(shí)后可將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮進(jìn)行長(zhǎng)期保存。