DGGE1102/1104變性梯度凝膠電泳/DGGE1102/1104時間溫度梯度凝膠電泳系統
DGGE介紹：變性梯度凝膠電泳法（denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE）分析PCR產物，如果突變發生在解鏈的DNA區域，檢出率可達100％，檢測片段可達1kb，圍為100bp-500bp。基本原理基于當雙鏈DNA在變性梯度凝膠中進行到與DNA變性溫度一致的凝膠位置時，DNA發生部分解鏈，電泳遷移率下降，當解鏈的DNA鏈中有一個堿基改變時，會在不同的時間發生解鏈，因影響電泳速度變化的程度而被分離。由于變性梯度凝膠電泳法是利用溫度和梯度凝膠遷移率來檢測，需要一套專用的電泳裝置，合成的PCR引物在5`末端加一段40bp-50bp的GC夾，以利于檢測發生于高熔點區的突變。
DGGE原理：變性梯度凝膠電泳系統(denaturing gradient gel electrophoresis, DGGE)的原理是使用一對特異性引物，PCR擴增微生物自然群體的16s rRNA基因，產生長度相同但序列有異的DNA片段的混合物。然后用變性梯度凝膠電泳分離產物混合物。變性梯度凝膠電泳DGGE膠是在6％聚丙烯酰胺膠中添加線性梯度的變性劑，變性劑的濃度由上到下，從低到高成線性梯度。在一定溫度下，在同一濃度的變性劑濃度下，序列不同的產物，其部分解鏈程度也不同，而產物解鏈程度又直接影響其電泳遷移率，結果不同的產物在凝膠上分離開來。在引物的5’端加上40個堿基左右的G-C串可使變性梯度凝膠電泳DGGE對序列差異的分辨率提高到近100％。所以變性梯度凝膠電泳法可用于微生物群落結構的研究、微生物種群動態的分析、富集培養物及分離物的分析、核糖體RNA同源性的分析。但由于在PCR擴增過程中可能存在堿基插入的錯誤、不同微生物細胞破壁難易的不同等而造成分析結果的偏差。
DGGE應用領域：DGGE變性梯度凝膠電泳系統主要應用于環境樣品細菌、古細菌、真菌、真核微生物的多樣性分析（土壤、水等樣品無需培養，直接提取DNA擴增檢測）動、植物體內外共生微生物的檢測；食品微生物的檢測；醫學領域堿基突變的檢測，雜合子檢測等等。
DGGE的特點：DGGE凝膠具有變性劑濃度梯度，可以根據DNA片段的退火溫度分辨不同片段，分辨率可達到一個堿基。DGGE具有精密控溫系統，比一般聚丙烯酰胺凝膠電泳具有更高的可重復性。DGGE可以對環境樣品DNA的PCR產物進行分離進而克隆測序，比一般聚丙烯酰胺凝膠電泳僅僅根據片段長短進行分離前進了一大步。幾乎可以檢出所有突變，無須對引物標記。
可將突變分子完好無損地同野生型分子分開用于進一步的分析。可檢測流感病毒基因多樣性，遺傳圖譜分析，單核苷酸差異SNP檢測。可檢測出象甲基化之類的DNA修飾。
DGGE實驗流程：DNA樣品的提取→ PCR擴增→ DGGE電泳→ 帶型分析→ 特征條帶的測序
DGGE技術指標：
兩段程控，每段最長時間24小時，控制精度1秒
電壓范圍0-200V，精度0.1%，電流范圍0-150mA，紋波系數0.1%
微電腦智能控制，中文液晶顯示，具有過壓、過流、過載和報警等裝置
鉑金電極插座裹覆于安全覆蓋內，避免意外觸及,降低緩沖區因高溫蒸發
緩沖式槽體以玻璃材質制成，于電泳作業時，不因高溫變形
完善的加熱，攪拌，緩沖檢測組件設計，使溫度分布均勻達±0.2ºC
其中緩沖檢測設計無需額外的蠕動泵，使緩沖區循環效果達狀態
高精度和高可靠性,可對單堿基突變進行檢測.
TTGE 時間溫度梯度凝膠電泳系統采用DGGE 變性梯度凝膠電泳系統的原理但不使用化學變性劑梯度，操作更簡單、快速并便于重復。DNA 上樣于含尿素的聚丙烯酰胺凝膠。電泳過程中逐步、均一地升高溫度，從而在電泳運行過程中產生一個線性的溫度梯度，變性環境由凝膠中均一的尿素濃度加上時間溫度梯度形成。
TTGE原理：
雙鏈 DNA 分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時，其遷移行為決定于其分子大小和電荷。不同長度的 DNA 片段能夠被區分開，但同樣長度的 DNA 片段在膠中的遷移行為一樣，因此不能被區分。TTGE 時間溫度梯度凝膠電泳技術在一般的聚丙烯酰胺凝膠基礎上，加入了尿素和甲酰胺梯度或是溫度梯度，從而能夠把同樣長度但序列不同的 DNA 片段區分開來。一個特定的 DNA 片段有其的序列組成，其序列組成決定了其解鏈區域(melting domain, MD)和解鏈行為(melting behavior) 。一個幾百個堿基對的 DNA 片段一般有幾個解鏈區域，每個解鏈區域有一段連續的堿基對組成。當溫度逐漸升高達到其的解鏈區域溫度時，該區域這一段連續的堿基對發生解鏈，當溫度再升高依次達到各其他解鏈區域。
TTGE應用領域：
TTGE 時間溫度梯度凝膠電泳系統技術在微生物生態學中的一個主要用途是分析微生物群落結構組成，該技術被廣泛應用于各微生物生態系統，包括土壤、活性污泥、人體和動物腸道、溫泉、植物根系、海洋、淡水湖、油藏等。絕大部分研究都是通過擴增細菌或古細菌的16S rRNA 基因來研究各生態系統中的細菌或古細菌群落多樣性。也有用真菌的通用引物擴增 18S rRNA 基因，從而研究真菌的群落多樣性。
TTGE技術指標：
溫度控制器與加熱器可使溫度緩慢地以0.1°C/hr 的速度上升
無需化學梯度，電泳時間由16小時縮短為5-8小時，使設置和制膠更方便
對照試劑與已證明有效的規程使你可以立即開展實驗
全中文液晶顯示，微電腦智能控制，具有過壓、過流、過載和報警等裝置
系統可對溫度、時間等信息進行實時監控，開蓋自動切斷電源
分辨率高，溫度梯度由微處理器控制，線性極為嚴格
節約時間，小面積溫度梯度板和小尺寸凝膠，只需要少量的凝膠溶液
加樣品量小，1～5mg的DNA或RNA上樣品量即可達到清晰的電泳分離效果
重現性好，電泳條件(如溫度、時間等)易于控制，可以保證電泳的重現性和結果的重復性
