原代兔背根神經(jīng)元細胞
培養(yǎng)信息:包被條件PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):神經(jīng)元細胞樣
傳代特性:屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:0.125%YI蛋白酶兔背根神經(jīng)元細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
兔背根神經(jīng)元細胞分離自脊椎背根神經(jīng)節(jié);感覺神經(jīng)母細胞發(fā)出軸突,呈束狀,左右對稱地從神經(jīng)管的背部進入,此時的脊神經(jīng)節(jié)即改稱為背根神經(jīng)節(jié)。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結構和功能單位是神經(jīng)元,即神經(jīng)細胞,其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大。但都具有胞體和樹突、軸突。胞體又叫核周體,內(nèi)含神經(jīng)絲、微管、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起,能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動,突起的大小和形態(tài)各不相同,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別。脊髓背根神經(jīng)節(jié)是周圍神經(jīng)的主要傳入神經(jīng)元,是感覺信號傳導的中繼站。背根神經(jīng)元細胞的獲取較為困難,需要在盡可能短的時間內(nèi)通過解剖顯微鏡獲得一定量的背根神經(jīng)節(jié)組織。神經(jīng)組織體外培養(yǎng)方法是當代神經(jīng)科學一項很有價值的研究手段,背根神經(jīng)節(jié)富含周圍神經(jīng)系統(tǒng)感覺神經(jīng)元,已廣泛用于軸突的導向及再生、中樞及周圍神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘形成、神經(jīng)營養(yǎng)因子作用及受體分布、神經(jīng)細胞衰老機制、基因治療、組織工程等神經(jīng)科學的研究。 |
方法簡介:
實驗室分離的兔背根神經(jīng)元細胞采用膠原酶-YI酶聯(lián)合消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結合化學試劑抑制法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔背根神經(jīng)元細胞經(jīng)β-Tubulin-Ⅲ免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
英文名稱 | Rabbit Dorsal Root Neuron Cells | 組織來源 | 脊髓組織 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | 細胞形態(tài) | 神經(jīng)元細胞樣 |
生長特性 | 貼壁 | 貨號 | GOY-01X1551 |
1. 取材的組織要盡快培養(yǎng)。如若不能及時培養(yǎng),可將組織浸泡于培養(yǎng)液內(nèi),放置于冰浴或4℃冰箱中,如果組織塊很大,應切成1cm3以下的小塊再低溫保存,但時間不能超過24h。
2. 從消化道、周圍有壞死組織等污染因素存在的區(qū)域取材,可用含500~1000u/ml的青BSS液漂洗5~10min,或用10%注射液沖洗浸泡10min再作培養(yǎng)。
3. 組織塊不易貼壁,可預先在瓶壁涂薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
4. 原代培養(yǎng)的1~2d內(nèi)要特別注意觀察是否有細菌、真菌、霉菌的污染,一旦發(fā)現(xiàn),要及時清除。
1. 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
2. 消化培養(yǎng)法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀),應用酶的生化作用和 非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結構松動,使團塊膨松,由塊狀 變成 絮狀,此時再采用機械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠 瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。
3. 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
4. 器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
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