小鼠第八因子相關抗原elisa試劑盒操作基本步驟：

1、 試劑準備：所有試劑在使用前應平衡至室溫，使用后請立即按照說明書要求保存試劑。實驗操作中請使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2、 加樣：加樣或加試劑時，*個孔與zui后一個孔加樣之間的時間間隔如果太大，將會導致不同的 “預溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準確性及重復性。一次加樣時間（包括標準品及所有樣品）控制在10分鐘內。*設置復孔進行實驗。

3、 溫育：為防止樣品蒸發，實驗時將加上蓋或覆膜的酶標板置于濕盒內，以避免液體蒸發；洗板后應盡快進行下步操作，任何時侯都應避免酶標板處于干燥狀態；同時應嚴格遵守給定的溫育時間和溫度。

4、 洗滌：洗滌過程中反應孔中殘留的洗滌液應在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應孔中吸水，同時要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標儀讀數。

5、 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請手甩幾下或少時離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液請依據所需的量配制使用，并使用相應的稀釋液配制，不能混淆。請精確 配制標準品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取檢測溶液A時，一次不要小于10 ），以避免由于不準確稀 釋而造成濃度誤差；請勿重復使用已稀釋過的標準品、檢測溶液A工作液、檢測溶液B工作液。

6、 反應時間的控制：加入底物后請定時觀察反應孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請提前加入終止液終止反應，避免反應過強從而影響酶標儀光密度讀數。

7、 底物：底物請避光保存，在儲存和溫育時避免強光直接照射。

小鼠第八因子相關抗原elisa試劑盒實驗意事項

1.血清標本如是以無菌操作分離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存，應在-70℃以下。

2.在使用微量加樣器時，吸取不同瓶子中液體后要更換槍頭，即使吸取標準品溶液。

3.吸取液體時速度不易太快，以免產生氣泡，吸取的量不夠準確。

4.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用；二則一些細菌的內源性酶，如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。1．5 吸取液體時要選用量程和需要量接近的微量加樣器吸，減少誤差。

5.液體全部加入酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行輕輕搖晃30s，使液體充分混合均勻，也使其得到充分的反應。

6.孵育時要使蓋板膜封好酶標板，防止水分蒸發，以防曲線不成線性。

7.實驗前30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只要取出所需量。

8.由于底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。

要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團，其有類似過氧化物的活性，因此，在以HRP為標記酶的ELISA測定中，如血清標本中血紅蛋白濃度較高，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相，從而與后面加入的HRP底物反應顯色

9.手工洗板時每次加入洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，防止交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。

10.檢測吸光度前應將酶標儀打開，將其預熱30min以上。

11.底物為TMB，避免與皮膚相接觸。終止液為2tool的濃**具有腐蝕性，應盡量避免接觸皮膚。

12.孵育的時間應該嚴格按照試劑盒說明書上的時間為準。

13.要盡量做雙孔實驗，這樣才既能保證數據的準確性，又能反映出試劑盒的精密度。

14.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用，從而引起假陰性結果。此外，凍融標本的混勻亦應注意，不要進行劇烈振蕩，反復顛倒混勻即可。

15.對樣本的結果有疑問時需要使用其他檢測方法進行驗證。

16.沒有去離子水或雙蒸水時，可以使用娃哈哈純凈水配制溶液，切勿使用自來水。

17.標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時，應離心沉淀后取上清檢測。

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