當前位置:上海撫生實業有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TKGF人角化細胞生長因子ELISA試劑盒實驗原理
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公司“質量是企業是生命之源”,選購優勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等
產品名稱 | KGF人角化細胞生長因子ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Keratinocyte Growth Factor, KGF Elisa Kit |
貨號 | FS-H63242 |
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Escherichia coli EPEC O 127 : K63 致瀉大腸埃希氏菌Escherichia coli EPEC O 127 : K63凍干物安全等級:2模式菌株:no質量控制。NB生長條件:37℃,好存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:95%
Microbacrium sp. 微桿菌屬Microbacrium sp.形態菌落形態:菌落淺黃色,圓形,表面光滑、濕潤、稍凸,不透明。分離基物:諾尼根; 采集地:海南省三亞市凍干物安全等級:1模式菌株:noLB培養基::蛋白胨 10.0g,酵母 5.0g,NaCl 10.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。生長條件:30℃,好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:99%
Annulohypoxylon stygium 暗色環紋炭團菌(斜面)Annulohypoxylon stygium試管斜面安全等級:1模式菌株:no綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。生長條件:25℃,好氧 純度:99%
Sphingomonaskoreensis SphingomonaskoreensisSphingomonaskoreensis分離基物:天然礦泉安全等級:1模式菌株:no產纖維素酶、蛋白酶2生長條件:30℃ 純度:99%
Rhizobacrdauci RhizobacrdauciRhizobacrdauci分離基物:胡蘿卜安全等級:1模式菌株:no180生長條件:30℃ 純度:97%
Sphingomonaspolyaromaticivorans SphingomonaspolyaromaticivoransSphingomonaspolyaromaticivorans安全等級:1模式菌株:no33生長條件:30℃ 純度:97%
Citrobacrsedlakii 塞氏檸檬桿菌Citrobacrsedlakii分離基物:人的糞便,法國安全等級:12生長條件:37℃ 純度:≥98%
Hyphomicrobiumzavarzinii HyphomicrobiumzavarziniiHyphomicrobiumzavarzinii安全等級:1模式菌株:no培養方法生長條件:30℃ 純度:98%
KGF人角化細胞生長因子ELISA試劑盒實驗原理3%性蛋白胨水(APW)少突膠質前體培養基腦動脈血管平滑肌GFAP(Glial Fibrillary Acidic Protein) 膠質纖維性蛋白(抗原)
TCBS瓊脂球狀少突培養基腦靜脈血管內皮AMPK Beta1 (AMP-activated Protein Kinase beta-1) 腺苷單磷活化蛋白激酶β1抗原
TCBS瓊脂角質培養基腦靜脈血管平滑肌MMP-1 基質金屬蛋白酶-1
多粘菌素B肉湯基礎(SCPB)角質培養基(特定)腦膜MMP-2 基質金屬蛋白酶-2(多肽抗原)
慶大霉素瓊脂成纖維培養基神經元beta-Amyloid(1-16) peptide (rat, mouse) β淀樣肽(1-16)(大鼠,鼠)
瓊脂扁桃體上皮培養基神經膠質MMP-3(matrix metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor) 基質金屬蛋白酶-3(抗原)
我妻氏培養基基礎口腔角質培養基海馬神經元MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7) 基質金屬蛋白酶-7(抗原)
60g/L蛋白胨肉湯支氣管上皮培養基腦微血管內皮MMP-14(Matrix metalloproteinase-14) 金屬基質蛋白酶-14
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