【儀表網(wǎng) 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)】近日，由國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局組織起草的《糧油檢驗(yàn) 糧食中T-2 HT-2毒素的測(cè)定 膠體金快速定量法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)已形成征求意見(jiàn)稿，現(xiàn)向社會(huì)公開(kāi)征求意見(jiàn)，截止日期為2023年5月17日，意見(jiàn)反饋郵箱tc270sc1@ags.ac.cn。
 

　　T-2/HT-2 毒素是由鐮刀菌屬中茄病鐮刀菌(Fusarium solani)等真菌代謝產(chǎn)生一種單端孢霉素類(lèi)化合物，主要污染小麥、大麥、玉米、大豆等谷物及其加工制品，對(duì)人類(lèi)健康及畜牧業(yè)構(gòu)成了較大危害。
 

　　食品中 T-2/HT-2 毒素檢測(cè)方法有高效液相色譜法，高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用法，這兩種方法的前處理復(fù)雜，儀器昂貴，無(wú)法滿足大批量食品樣品快速篩查的需求，因此，尋求一種快速，準(zhǔn)確，有效的 T-2/HT-2 毒素快速檢測(cè)方法十分必要。
 

　　膠膠體金快速定量法是一種基于酶聯(lián)免疫法的基礎(chǔ)上結(jié)合單克隆抗體技術(shù)建立的新型檢測(cè)技術(shù)，在糧食真菌毒素檢測(cè)領(lǐng)域運(yùn)用較為廣泛，在黃曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、嘔吐毒素和赭曲霉毒素 A 四種毒素上的檢測(cè)，已十分成熟。本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目利用膠體金免疫層析技術(shù)對(duì)糧食中 T-2/HT-2 毒素定量分析，可提高糧食樣品檢測(cè)、監(jiān)測(cè)效率，降低成本，保護(hù)環(huán)境，保障糧食質(zhì)量安全和人民群眾身體健康。
 

　　本文件按照 GB/T 1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第 1 部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。參考GB/T 5491 糧食、油料檢驗(yàn) 扦樣、分樣法；GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法；GB/T 27404 實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)等規(guī)程內(nèi)容編制。
 

　　本文件規(guī)定了T-2/HT-2毒素總量的膠體金快速定量檢測(cè)方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、樣品測(cè)定、結(jié)果描述和重復(fù)性。本文件適用于小麥、玉米等糧食及其制品中T-2/HT-2毒素的快速定量檢測(cè)。
 

　　原理：
 

　　試樣提取液中T-2/HT-2毒素與檢測(cè)條中的膠體金微粒發(fā)生呈色反應(yīng)，顏色深淺與試樣中T-2/HT-2毒素含量相關(guān)。用讀數(shù)儀測(cè)定檢測(cè)條上檢測(cè)線和質(zhì)控線顏色深淺，根據(jù)顏色深淺和讀數(shù)儀內(nèi)置曲線自動(dòng)計(jì)算出試樣中T-2/HT-2毒素含量。
 

　　儀器設(shè)備及材料：
 

　　1.粉碎機(jī)：可使試樣粉碎后全部通過(guò) 20 目篩。
 

　　2.天平：分度值 0.01 g。
 

　　3.漩渦振蕩器。
 

　　4.濾紙：采用 Whatman 2V(或等效)濾紙。
 

　　5.移液器：100 μL ～ 1000 μL、20 μL ～ 200 μL。
 

　　6.離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于 4000 r/min。
 

　　7.ROSA T-2/HT-2 毒素膠體金快速定量檢測(cè)條 1)：需冷藏儲(chǔ)存，具體儲(chǔ)存條件參照使用說(shuō)明；技術(shù)要求見(jiàn)附錄 A。
 

　　8.孵育器：可進(jìn)行 45 ℃恒溫(控溫精度 ± 1 ℃)孵育。
 

　　9.讀數(shù)儀：可測(cè)定并顯示膠體金定量檢測(cè)條的測(cè)定結(jié)果。
 

　　樣品測(cè)定：
 

　　1.將膠體金檢測(cè)條(6.7)從冷藏狀態(tài)(2 ℃ ~ 8 ℃)取出放置至室溫。將孵育器(6.8)預(yù)熱至 45 ℃。將檢測(cè)條(6.7)平放在孵育器(6.8)凹槽中，打開(kāi)加樣孔。
 

　　2.準(zhǔn)確移取 300 μL 待測(cè)溶液(7.3)，加入檢測(cè)條加樣孔中，關(guān)閉加樣孔及孵育器(6.8)蓋。
 

　　3.孵育 10 min 后，取出檢測(cè)條(6.7)觀察 C 線(質(zhì)控線)和 T 線(檢測(cè)線)的顯色情況。若出現(xiàn)下述情況，視為無(wú)效檢測(cè)。1) C線不出現(xiàn)；2) C線出現(xiàn)，但彌散或嚴(yán)重不均勻；3) C線出現(xiàn)，但T1或T2線彌散或嚴(yán)重不均勻。
 

　　4.選擇讀數(shù)儀(6.9)的 T2 檢測(cè)頻道，并設(shè)定為基質(zhì) 00(MATRIX 00)，開(kāi)始樣品測(cè)定，測(cè)定需在2 min 內(nèi)完成，讀數(shù)儀(6.9)自動(dòng)顯示樣品中 T-2/HT-2 毒素的含量。
 

　　若讀數(shù)儀顯示“ + 250ppb”，需移取 300 μL 待測(cè)溶液(7.3)于離心管中，加入 1.0 mL 稀釋緩沖液混勻后，按照 8.1 ～ 8.4 進(jìn)行測(cè)定，其中基質(zhì)設(shè)定為 01(MATRIX 01)。
 

　　結(jié)果表述：
 

　　試樣中T-2和HT-2毒素總含量由讀數(shù)儀自動(dòng)計(jì)算并顯示，單位為微克每千克(μg/kg)。方法檢測(cè)限為5 μg/kg。
 

　　重復(fù)性：
 

　　在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作人員使用同一儀器，按照相同的測(cè)定方法，對(duì)同一被測(cè)試對(duì)象相互獨(dú)立進(jìn)行測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值大于其算術(shù)平均值20%的情況不超過(guò)5%。
 

　　更多詳情請(qǐng)見(jiàn)附件。