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ELISA試劑盒檢測過程中的操作步驟

時間:2019/4/9閱讀:275
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ELISA試劑盒檢測過程中的操作步驟

一、ELISA實(shí)驗(yàn)通用規(guī)則
1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過2%。可用水和電子天平進(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時。
3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4、實(shí)驗(yàn)時,要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時,避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動功能。
9、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時,每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機(jī)時,倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
13、檢測前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會影響結(jié)果。
16、溫浴時間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
二、下面所提到的是針對我公司的ELISA產(chǎn)品會出現(xiàn)的問題及解決辦法
1. 加入反應(yīng)終止液后,沒有吸光值或吸光值偏低。
a.原因:未加入酶標(biāo)記物。
解決辦法:請按照操作步驟進(jìn)行。
b.原因:試劑盒內(nèi)容物未能充分回。
解決辦法:確定試劑盒內(nèi)容物回溫后再進(jìn)行操作。
c.原因:室溫太低。
解決辦法:若室溫太低(<19℃),請于操作步驟4,適當(dāng)延長溫育時間。
d.原因:未使用試劑盒的清洗液清洗。
解決辦法: 請用試劑盒內(nèi)所提供的清洗液清洗。
e.原因:試劑盒已過有效期限。
解決辦法:請更換成仍在有效期限內(nèi)的試劑盒。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳,或是平行性不好。
a.原因:溫育位置避光不好或受到氣流干擾。
解決辦法: 請確認(rèn)溫育位置既不透光也不透風(fēng)(如抽屜內(nèi))。
b.原因:操作時間拖太久。
解決辦法:請?jiān)诜椒ㄊ炀毢笤龠M(jìn)行操作。
c.原因:微孔間相互污染。
解決辦法: 加樣品時,請小心勿濺出微孔外,以免造成其它微孔的污染。
d.原因:標(biāo)準(zhǔn)品或酶標(biāo)記物所加入的量不一致。
解決辦法:請使用已校正過的移液槍,并確保其與吸頭之間有高度密合性。
e.原因:添加樣品或試劑的操作方法不正確。
解決辦法:加樣品或試劑時,吸頭請勿接觸微孔。
f.原因:洗板過程發(fā)生問題(如管路堵塞、洗完板后未立刻進(jìn)行下一步驟)。
解決辦法:請隨時監(jiān)控洗板機(jī)洗板過程,洗完后立即進(jìn)行下一步驟。
3. 吸光值均偏高(或線性不夠陡)。
a.原因:室溫太高(>25℃)。
解決辦法: 若無法降低室內(nèi)溫度,請適當(dāng)縮短步驟4的溫育時間。
b.原因:底物溶液受到污染。
解決辦法: 若發(fā)現(xiàn)底物溶液已呈現(xiàn)淡藍(lán)色,請不要再使用。
c.原因:反應(yīng)時間超過太久。
解決辦法:請控制反應(yīng)時間。
d.原因:酶標(biāo)記物污染了盒內(nèi)其它試劑。
解決辦法:使用過的吸頭應(yīng)立即丟棄,可避免試劑間相互污染,凡是試劑(特別是酶標(biāo)記物與底物溶液)接觸過的容器應(yīng)立即清洗干凈。(先以漂白水浸泡,再以清水沖洗干凈,可確保無殘留)

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