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轉化細胞的原代培養方法

時間:2021/4/2閱讀:296
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轉化細胞原代培養:

1.取出小鼠后瀝干酒精,放入超凈臺內,固定在泡沫板上。

2.用鑷子提起皮膚,用解剖剪剪開皮膚一個橫切口,將皮膚向上撕開,然后剪開肌肉等,暴露出腹腔,在左側找到脾臟,用彎頭眼科鑷取出脾臟,置于無菌培養皿中。

3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次,并剔除多余無用的組織。

4.將篩網置于平皿中,脾臟置于篩網上,用彎頭鑷鑷住,輕輕在篩網上進行碾磨,同時不停滴加不含血清的培養液沖洗。

5.將碾磨好的細胞懸液吸入至離心管中,離心(1000rpm,5min),吸去上清(去除血液等)。

6.加入10ml培養液,吹打混勻,取樣計數。

7.將稀釋好的細胞懸液分裝于培養瓶中,輕輕搖晃混勻,在培養瓶上。

轉化細胞注意事項:

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好,培養液是否有漏液、渾濁等現象,若有上述現象發生請及時和我們。

2. 仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面,顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,將細胞置于培養箱內靜置培養過夜,隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁,若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力,如果證實細胞活力正常,請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養;如果染色結果顯示細胞無活力,請拍下照片及時和我們,信息確認后我們為您再免費寄送一次。

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