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PCR反應總RNA提取操作流程

時間:2024/9/9閱讀:323
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PCR反應總RNA提取操作流程:

1、A組織樣本:迅速將新鮮的組織切成合適的大小,在液氮中充分研磨后加裂解液裂解,或直接加入裂解液后用勻漿器勻漿。每30-50mg組織加1ml Trizol。

2、B全血樣品:加入3-5倍體積的紅細胞裂解液到血樣中,室溫孵育10min,室溫3500rpm離心6min。棄上清,原每2-3ml全血樣品加1mL Trizol。

3、C細胞樣品:懸浮液中生長的細胞,通過離心收集細胞后,每1×105?106細胞加入1mL Trizol,移液器吹打混勻,直接裂解或-80℃儲存一個月。貼壁生長的細胞,有兩種處理方法。一種是移除培養基后,將1mL Trizol直接加入直徑3.5cm的培養皿中裂解細胞。或是先用yi 蛋白酶將貼壁細胞消化下來并收集后,再加入1mL Trizol進行裂解。(Note:加入Trizol前, PBS充分洗滌細胞去除殘余培養基。)


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