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初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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qPCR擴(kuò)增過程與CT值有關(guān)要素

時(shí)間:2025/2/17閱讀:280
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    Ct值qPCR擴(kuò)增過程中,擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的熒光閾值時(shí)的所對(duì)應(yīng)的擴(kuò)增循環(huán)數(shù)(Cycle Threshold)。

CT值與有關(guān)要素:

    閾值循環(huán)數(shù)Threshold cycle (Ct) 也寫作Cq值,熒光信號(hào)大于熒光閾值時(shí)PCR循環(huán)數(shù)。儀器軟件通常將第3-15個(gè)循環(huán)的熒光值設(shè)為基線(baseline),是由于測(cè)量的偶然誤差引起的。閾值(threshold)一般是基線的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。在實(shí)際操作中也可以手動(dòng)調(diào)節(jié)。高于閾值的熒光信號(hào)被認(rèn)為是真實(shí)的信號(hào),用于定義Ct值。Ct會(huì)受到閾值的影響,每次試驗(yàn)由于樣品和儀器的不同會(huì)導(dǎo)致基線不同,進(jìn)而影響閾值和Ct值。

    模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在一定線性關(guān)系,起始模板量濃度越高,Ct值越小;起始模板量濃度越低,Ct值越大。PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,Ct值的重現(xiàn)性較好,即相同含量的初始模板,得到的Ct值是相對(duì)穩(wěn)定的。

    Ct值不是恒定不變的,可以受到不同樣品、不同儀器的影響,即使相同的樣品在相同的儀器上重復(fù)2遍,Ct值也會(huì)存在差異。


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