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105次VEGT-Delisa試劑盒常見問題的處理
① 確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑,包括一抗、二抗、三抗及底物等.
② 確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入,是否孵育了足夠的時間.
③ 對照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體,以及所用的檢測系統(tǒng)是否和一抗匹配,這一點(diǎn)是非常重要的.比如,如果一抗是兔來源的抗體,二抗一定要用抗兔的二抗來匹配;或一抗是小鼠的IgM一抗,二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM(不是IgG)二抗.
④ 檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液.
⑤ 檢查抗體的有效期和保存條件,尤其是標(biāo)記了酶或熒光素的抗體,現(xiàn)在大多數(shù)試劑公司的抗體均要求在4~8℃條件下保存,應(yīng)避免反復(fù)凍融,試劑保存時一定要避免與揮發(fā)性有機(jī)溶劑同放一室,以免降低抗體的效價.
⑥ 檢查標(biāo)本的儲存條件,用已知陽性的標(biāo)本來同時做陽性對照.
⑦ 檢查色原/底物溶液,簡單的檢測方法是將一滴標(biāo)記有酶的抗體加入到制備好的底物溶液中,如果底物發(fā)生預(yù)期的顏色變化,則可排除底物的因素.需要注意的是,有些底物在制成工作液后應(yīng)在一定時間內(nèi)用完,否則會失效.
⑧ 檢查沖洗液是否和反應(yīng)試劑匹配,溶液的pH值很重要,與過氧化物酶底物匹配的溶液中不應(yīng)含有疊氮鈉.
⑨ 檢查復(fù)染劑和封片劑是否和所使用的色原匹配.
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