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貨號(hào)	FS-X10312

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：DRP1和DnM1抑制劑(Mdivi-1)

英文名稱：Mdivi-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10312

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Mdivi-1

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

Mdivi-1是一種有效的，細(xì)胞透過的DRP1和D nM1抑制劑，可用于癌癥研究。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：338967-87-6

別名：Mitochondrial division inhibitor 1

純度：98.75%

分子量：353.22

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

紫紅曲霉巨噬調(diào)控相關(guān)蛋白LRRFIP1抗體Human PDS5A 天青殺(AZU)

貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型促黃體生成抗體Human PDS5B 天門冬酰-tRNA合成(DARS)

紫芝整合和生長因子樣蛋白1抗體Human PDSS2 天門冬轉(zhuǎn)/谷草轉(zhuǎn)(GOT/GPT)

微小桿菌相似腫瘤抑制基因HUGL抗體Human PDE6A 天門冬基轉(zhuǎn)移(AST)

植物乳桿菌LAMTOR1蛋白抗體Human PDXDC1 特異性巨噬武裝因子(SMAF)

齊藤土星形酵母LIM結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白3抗體Human PDE6B 套膜蛋白(iNV)

彩色豆馬勃ILK結(jié)合蛋白LIMS2抗體Human PDCD5 糖脂抗體(glycolipid)

茄勞爾氏菌淋巴特異性接頭蛋白抗體Human PXDN(Peroxidasin homolog) 糖原磷化同工MM(GP-MM)

凍膠假絲酵母表面免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子4抗體Human PDCD6 糖原磷化同工II(GP-II)

球孢白僵菌淋巴抗原6重復(fù)位點(diǎn)蛋白G6F抗體Human PDCD7 糖原磷化同工BB(GP-BB)

樁蛋白抗體Human PDCD6IP 糖原磷化(GP)

雞葡萄球菌脂蛋白受體相關(guān)蛋白/低密度脂蛋白相關(guān)蛋白的相關(guān)蛋白1抗體Human PDCL2 糖原合成激3(GSK-3)

大肥菇皮屑樣蛋白2抗體Human PDCL 糖原合成激(GSK)

慢生根瘤菌層粘蛋白α3抗體Human PDCD10 糖缺失性轉(zhuǎn)鐵蛋白(CDT)

球孢白僵菌溶體相關(guān)膜蛋白1抗體Human PCNP 糖皮質(zhì)激受體β(GR-β)

解淀粉鹽盒菌羧肽抑制劑抗體Human PDCD2(Programmed cell death protein 2) 糖皮質(zhì)激受體α(GR-α)

巨大芽孢桿菌Bacillus│megaterium 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)(N)擬人參皂RT5

黑曲霉Aspergillus│niger 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)人參皂Rf

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>85.0%(HPLC)人參皂Rd
DRP1和DnM1抑制劑(Mdivi-1)枯草芽孢桿 2,6-二甲肌型肌激

Pseudomonas torakense 2-氨基-6-苯甲線粒體肌激2

粘質(zhì)沙雷氏 4,6-二氫-1H-吡咯[3,4-C]吡唑-5-甲丁酯成纖維生長因子5

枯草芽孢桿 2-甲基煙甲酯封閉蛋白4

豌豆根瘤 Cbz-L-D-谷; alpha芐脂封閉蛋白5

馬德里青霉 3-氟-4-苯堿脂酰轉(zhuǎn)移I

大腸埃希氏 3-溴-4-氟苯性磷

松口蘑 2,2-二氟-5-甲酰苯并二噁茂膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)輔助蛋白

木賊鐮孢 2,4-二氟苯乙金屬硫蛋白1

谷棒桿 3-氟鄰苯二金屬硫蛋白2

枯草芽孢桿煙肌酯DCYTB

釀酒酵母 6-甲基水楊乙酯紅富鐵

pDC315 2-溴-5--3-骨形成蛋白8B

平菇 2-溴-5--3-Na-K-ATP

硬毛栓孔 2-甲基-3(5或6)-糠硫基吡α酮戊二
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)