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產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9772 |
產品屬于:
產品名稱:主動脈內皮細胞
產品規格:5×105
貨號:FS-01X9772
產品類型:原代細胞
單位:T25/瓶
提供細胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報告
保存培養溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人基質金屬蛋白4(MMP-4)ELISA試劑盒英文名稱:Human matrix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISA Kit 規格:96T/48T
人神經特異性烯化(NSE)ELISA試劑盒英文名稱:Human Neuron-specific enolase,NSE ELISA Kit規格:96T/48T
人前列腺D合成(PGDS)ELISA試劑盒英文名稱:Human Prostaglandin D Synthase,PGDS ELISA Kit規格:96T/48T
人胃蛋白原C(PG-C)ELISA試劑盒英文名稱:human Pepsinogen C,PG-C ELISA Kit規格:96T/48T
人胃蛋白原A(PG-A)ELISA試劑盒英文名稱:human Pepsinogen A,PG-A ELISA Kit規格:96T/48T
人尿激型纖溶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒英文名稱:Human Urokinase-type Plasminogen Activator Receptor,PLAUR/uPAR ELISA Kit規格:96T/48T
人尿激型纖溶原激活物(uPA)ELISA試劑盒英文名稱:Human urokinase plasminogen activator,uPA ELISA Kit規格:96T/48T
人血管生成受體/含免疫球蛋白樣環和上皮生長因子樣域酪激2(Tie-2)ELISA試劑盒英文名稱:Human tyrosine kinase with immunoglobulin-like and EGF-like domains 2,Tie-2 ELISA Kit規格:96T/48T
人基質金屬蛋白8/中性粒細胞膠原(MMP-8)ELISA試劑盒英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 8/Neutrophil collagenase,MMP-8 ELISA Kit 規格:96T/48T
人基質金屬蛋白7(MMP-7)ELISA試劑盒英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 7,MMP-7 ELISA Kit 規格:96T/48T
人基質金屬蛋白3(MMP-3)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 3,MMP-3 ELISA Kit 規格:96T/48T
人基質金屬蛋白2/明膠A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA試劑盒英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A,MMP-2 ELISA Kit 規格:96T/48T
人基質金屬蛋白13(MMP-13)ELISA試劑盒英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 13,MMP-13 ELISA Kit 規格:96T/48T
人基質金屬蛋白10(MMP-10)ELISA試劑盒英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 10,MMP-10 ELISA Kit 規格:96T/48T
人基質金屬蛋白1(MMP-1)ELISA試劑盒英文名稱:Human Matrix metalloproteinase 1,MMP-1 ELISA Kit 規格:96T/48T
人FMS樣酪激3(Flt3)ELISA試劑盒英文名稱:Human FMS-like tyrosine kinase 3,Flt3 ELISA Kit規格:96T/48T
人FMS樣酪激3配體(Flt-3L)ELISA試劑盒英文名稱:Human FMS-like tyrosine kinase 3 ligand,Flt-3L ELISA Kit 規格:96T/48T
人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒英文名稱:Human alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP ELISA Kit規格:96T/48T
主動脈內皮細胞WDR19 WD重復膜蛋白19抗體規格: 0.2ml
WSB2/WD SOCS box protein 2 信號傳導抑制蛋白WD重復蛋白2抗體規格: 0.2ml
WWP1 WW結構域E3泛連接1抗體規格: 0.2ml
YY1AP1/HCCA2 肝癌相關蛋白2抗體(轉錄因子YY1結合蛋白1抗體)規格: 0.2ml
ZNF146 鋅指蛋白146抗體規格: 0.2ml
ZNF23 鋅指蛋白23抗體規格: 0.2ml
ZNF364/BCA2/RNF115 乳腺癌相關基因2抗體(鋅指蛋白364)規格: 0.2ml
FAM89B/MMTV-R 乳腺腫瘤病毒受體同源蛋白抗體規格: 0.2ml
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