細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：小鼠胰腺癌細胞    

產品英文：LTPA

貨號：FS-01X9671

細胞培養條件：MEM+10%FBS+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人嗜鉻蛋白A(CgA)ELISA試劑盒 Human Chromogranin,CgA ELISA Kit

人視網膜母細胞瘤抑制蛋白(pRB)ELISA試劑盒 Human retinoblastoma tumor suppressor protein,pRB ELISA Kit

人生長調節致癌基因α/黑瘤生激因子(GROα/CXCL1/MGSA)ELISA試劑盒 Human growth-regulated oncogeneα/melanoma growth stimulating activity,GROα/MGSA ELISA Kit

人成熟促進因子(MPF)ELISA試劑盒 Human maturation promoting factor,MPF ELISA Kit

人去唾液糖蛋白受體(AGSPR)ELISA試劑盒Human asialoglyco protein receptor,AGSPR ELISA Kit

人小扁豆結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體3(AFP-L3)ELISA試劑盒Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 3,AFP-L3 ELISA Kit

人小扁豆結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體2(AFP-L2)ELISA試劑盒Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 2,AFP-L2 ELISA Kit

人小扁豆結合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質體1(AFP-L1)ELISA試劑盒Human alpha-fetoprotein Lens culinaris agglutiin 1,AFP-L1 ELISA Kit

人黑色瘤標記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒Human Melanoma Marker A,MART/Melan-A ELISA Kit

人高分子量細胞角蛋白(CK-HMW)ELISA試劑盒Human cytokeratin High Molecular Weight,CK-HMW ELISA Kit

人肝癌抗原(PHC)ELISA試劑盒Human primary hepatic carcinoma,PHC ELISA Kit

人鼻咽癌(NPC)ELISA試劑盒Human nasopharyngeal carcinoma,NPC ELISA Kit

人膀胱癌抗原(UBC)ELISA試劑盒Human urinary bladder cancer antigen,UBC ELISA Kit

人廣譜細胞角蛋白(P-CK)ELISA試劑盒Human pan-cytokeratin,P-CK ELISA Kit

人癌基因蛋白質p190/bcr-abl ELISA試劑盒Human Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA KitHuman Oncogene Protein p190/bcr-abl ELISA Kit

人膀胱腫瘤抗原(BTA)ELISA試劑盒Human Bladder tumor antigen,BTA ELISA Kit

人BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)ELISA試劑盒Human BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISA Kit

人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)ELISA試劑盒Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TGSF ELISA Kit

人色上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒Human pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA Kit
小鼠胰腺癌細胞ADAM9  去整合樣金屬蛋白9抗體 0.2ml

ABHD5  自水解結構域5蛋白抗體 0.2ml

MRC1/CD206  巨噬細胞甘露糖受體抗體 0.2ml

Bone Sialoprotein/BSP  骨涎蛋白 0.1ml

NOX4/NADPH oxidase 4  NADPH氧化4抗體 0.1ml

ABP1  植物生長ABP1抗體 1ml

Podoplanin Protein/gp36  平足蛋白抗體(淋巴管內皮細胞蛋白) 0.1ml

Cathelicidin  抗菌CAMP抗體 0.1ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。