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實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
產品名稱 | 分類 | 貨號 |
類鼻疽伯克霍爾德菌(BP)核酸檢測試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10333 |
PCR技術的定量原理:?
擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,最終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
-333℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
亞德食烷菌南大西洋細菌模式菌株: no沉積物/TVMC沉積物(45-50cm)提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 512生長條件: 25℃
大腸埃希氏菌生長條件: 37℃培養基: 33提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
北極海單胞菌潛在的有機污染物降解菌/分離自石油-PAHs富集菌群模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 821生長條件: 4℃
枯草芽孢桿菌枯草亞種生長條件: 30℃培養基: 0002提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
釀酒酵母生長條件: 25-28℃培養基: 0013提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no
胎兒別樣謝瓦氏菌培養基: 0002模式菌株: no底泥提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
-334℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
泊庫島食烷菌有機污染物降解菌/石油烴類降解菌模式菌株: no水樣/海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 472生長條件: 28℃
擬諾卡氏菌 真空冷凍干燥法生長條件: 37℃提供形式: 凍干物模式菌株: no培養基: 70
五通橋毛霉腐乳。模式菌株: no腐乳提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: CM0085生長條件: 28-30℃
球孢鏈霉菌球孢亞種培養基: 12模式菌株: no植物根際提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 28-30 定期移植法
豬鏈球菌用于研究教學模式菌株: no培養基提供形式: 凍結物安全等級: 2培養基: 396生長條件: 37
莫斯科沙門氏菌培養基: CM00519,12 g,q -提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
-335℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
福氏志賀氏菌培養基: CM0051B 5 V 7...提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
對甲酚p-CresolCP500ml
ER0812MboI1500 units4
P6782-100mgPeroxidase, Horseradish (HRP) 辣根過氧化物酶9003-99-0100mg
BCA Protein Assay Kit500T
馬來 (順丁烯二)100g
有機擔體403403 organic supportGC60-80目25g
ER0922Bsh1236I (BstUI)2500 units11
D2510-10GDexy7nocholic 脫氧膽201-478-510g
幾丁質(甲殼素)10g
Uracil50g
大鼠血小板衍生生長因子(PDGF)ELISA試劑盒 ,英文名: PDGF ELISA Kit
人抗類固醇抗體(SCA)ELISA檢測試劑盒Humansteroidcellaoaibody,SCAELISAKit 96T/48T
大鼠Ras相關C3肉素底物1(RAC1)免疫試劑盒 Rat Ras-related C3 Botulinum Toxin Subsate 1,RAC1 ELISA Kit
CLIAKitforSP-A(MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA)ELISAKit小鼠肺表面活性物質相關蛋白A規格:48T/96T
肉類總乳比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitAVP人精氨加壓素規格:48T/96T
類鼻疽伯克霍爾德菌(BP)核酸檢測試劑盒D-核糖規格:25g用途:微生物指示劑
化MRS瓊脂(AMRSA)規格:250g用途:用于食品中乳菌的分離培養或計數
鳥氨脫羧酶-O157菌生化鑒定規格:20支詳情介紹
抗生素檢定培養基3號(usp)規格:250g用途:用于藥品抗生素效價測定
Kovacs氏靛基質試劑盒規格:5ml*2拉丁屬名:Kovacs氏靛基質試劑盒
M--H瓊脂培養基規格:250g拉丁屬名:Mueller-Hinton Broth Medium
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