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貨號 | AXB10252 | 規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 |
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細胞形態 | 上皮細胞樣 | 生長特性 | 貼壁細胞 |
產品公司所有產品均不得用于人類或動物之臨床診斷或治療,僅可用于工業或科研等非醫療目的。
產品名稱 | 人Adenovirus5轉化胚腎細胞;2V6.11 | 貨號 | AXB10252 |
規格 | 1×10?cells/T25培養瓶 | 英文名 | 2V6.11:2V611 |
分類 | 人細胞系 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
商品介紹:
種屬 | 人類 |
年齡(性別) | 男性,胎兒 |
組織來源 | 腎;用腺病毒5(Ad5)DNA轉化;用腺病毒前區4質粒DNA轉染 |
細胞形態 | 貼壁細胞 |
細胞形態 | 上皮細胞樣 |
詳情介紹 | 2V6.11細胞是2001年從人胚腎細胞株293 [HEK-293]衍化而來,293 [HEK-293]細胞用攜帶Zeocin-抗性標記的質粒pVgRXR轉染得到293pVgRXR細胞。隨后,用包含編碼E4 24K的Ad5 E4ORF6基因的質粒pEKORF6轉染。pEKORF6從包含潮霉素抗性基因的質粒pIndHydro衍生而來,載體包含SV40病毒序列。2V6.11細胞株最初從含潮霉素的培養液中用克隆環分離單克隆得到。2V6.11細胞誘導表達的人腺病毒E4 34KDa蛋白可通過免疫印跡法檢測;2V6.?脀? |
生長培養基 | MEM+10% FBS+1% P/S |
推薦傳代比例 | 1:2-1:4 |
推薦換液頻率 | 2~3次/周 |
凍存條件 | |
凍存液 | 55% 基礎培養基+40%FBS+5%DMSO |
溫度 | 液氮 |
培養條件 | |
氣相 | 空氣,95%;CO2,5% |
溫度 | 37℃ |
保藏機構 | ATCC; CRL-2784 ATCC; JHU-67 |
細胞凍存注意事項:
(1) 細胞的收獲
用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿 90% 的時候,這時細胞生長狀態好,細胞數量也多,并且在收獲細胞前 24 小時換一次培養液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣,用 100xg 離心 5 分鐘收集細胞再重懸,活細胞記數。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是 400-1000 萬 細胞 /ml ),加入已經配好的等體積的培養液保護劑混合溶液中輕輕混勻,分裝到凍存管,冷凍保存。
(2) 保護劑的使用
細胞凍存中, 一般使用DMSO 作為保護劑。在細胞凍存中, DMSO 使用的最終濃度一般是 5-15% ,某種具體細胞的凍存液中的DMSO濃度可以從ATCC查到。對特別敏感的細胞特別是雜交瘤細胞在凍存時使用 95% 血清和 5%DMSO 可能會好些。保護劑在使用時先用培養液或血清配成最終濃度的2倍,再與等體積的懸浮細胞的培養液混合。
(3) 細胞凍存的速率
細胞的冷凍速率最適控制在讓細胞有足夠的時間脫水而又不被過度脫水導致細胞損害。對大多數細胞來說,每分鐘降 1 至 3 ℃是合適的。通常的操作是把細胞先在-20℃1-2個小時,再放入 -80℃冰箱過夜(如果沒有-80℃冰箱,可以用干冰替代),再轉入液氮罐或低于 -130℃的冰箱長期保存。
(4) 儲存環境
細胞長期保存溫度是 -130 ℃或更低。液氮罐中氣態層溫度在 -140℃至 -180℃之間,細胞可保存在氣態層或浸入液氮中,如果可能最好保存在氣態層,因為這樣可避免由于有液氮進入凍存管而在拿出細胞時引起爆炸(但是這樣液氮罐內只能存儲少量液氮,需要經常添加)。細胞也可以在-80℃冰箱保存幾個月左右的時間。
操作步驟:
(1) 細胞系培養:取6cm細胞皿,向每孔中加入2mL含1~2×105個細胞培養液,37℃ CO2培養密度至40%~60%,密度過大,轉染后不利篩選細胞。
(2) 轉染液制備:在EP管中制備以下兩液(為轉染每一個孔細胞所用的量)
A液:用不含血清培養基稀釋1ug 質粒DNA。
B液:用不含血清培養基稀釋2ul脂質體。
分別將A液與B液輕彈混勻,靜置5分鐘。
(3) 吸取B液加入至A液中,輕彈混勻。室溫中置10-15分鐘。
(4) 轉染準備:用1mL不含血清培養液漂洗兩次,再加入4mL不含血清培養液。
(5) 轉染:把A/B復合物緩緩加入培養液中,搖勻,37℃溫箱置6~24小時,吸除無血清轉染液,換入正常培養液繼續培養。
(6) 瞬時轉染后,可在48h-72h細胞長滿之后,提取細胞蛋白或者RNA,驗證敲減/過表達效率。
公司正在出售的產品:
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Anti-C/EBP Beta/FITC 熒光素標記轉錄調節因子C/EBP β抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
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LEO1 英文名稱: RNA聚合酶相關蛋白LEO1抗體 0.1ml
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Anti-CLDN4/Claudin 4/FITC 熒光素標記緊密連接蛋白4抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
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Anti-Phospho-DARPP32 (Thr34) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠0酸化多巴胺、cAMP調節0蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
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Rhesus antibody Rh YES1 原癌基因酪蛋白激酶Yes1抗體 規格 0.1ml
Anti-Phospho-DARPP32 (Thr34) /FITC 熒光素標記兔抗人、大、小鼠0酸化多巴胺、cAMP調節0蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
MYO/MB(Mouse Myoglobin) ELISA Kit 小鼠肌紅蛋白Multi-class antibodies規格: 48T
Anti-Cullin 4a/FITC 熒光素標記Cullin 4a蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
人Adenovirus5轉化胚腎細胞;2V6.11Rhesus antibody Rh DCUN1D2 DCN1樣蛋白2抗體 規格 0.2ml
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L-ENK 英文名稱: 亮酸腦啡肽抗體 0.1ml
類藥單克隆抗體 小鼠單抗 1
Anti-Cullin 4a/FITC 熒光素標記Cullin 4a蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格: 0.2ml
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