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產(chǎn)地	國產(chǎn)	加工定制	是
適用領(lǐng)域	科研	貨號	FS-01X9776

產(chǎn)品屬于：

產(chǎn)品名稱：冠狀動脈平滑肌細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：5×105

貨號：FS-01X9776

產(chǎn)品類型：原代細(xì)胞

單位：T25/瓶

提供細(xì)胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養(yǎng)溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達到純化。

4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄

采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項：

1. 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張）。

2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。

3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。

5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。

6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。

7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

人軸突生長誘向因子4(Ntn4)ELISA試劑盒英文名稱：Human Netrin-4,Ntn4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人軸突生長誘向因子1(Ntn1)ELISA試劑盒英文名稱：Human Netrin-1,Ntn1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人再生基因蛋白IV(REG-4)ELISA試劑盒英文名稱：Human regenerating gene Ⅳ,REG-4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人多功能蛋白聚糖(VS)ELISA試劑盒英文名稱：human versican/PG-M/PG-350,VS ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人B細(xì)胞κ 輕基因增強子核因子抑制因子ε(Nfkbie)ELISA試劑盒英文名稱：human nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor epsilon,Nfkbie規(guī)格:96T/48T

人ADAM金屬含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA試劑盒英文名稱：human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4,ADAMTS4 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人類似RIKEN cDNA 4933429F08 基因 ELISA試劑盒英文名稱：human similar to RIKEN cDNA 4933429F08 gene ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人孕和adipoQ受體家族成員Ⅶ(PAQR7)ELISA試劑盒英文名稱：human progestin and adipoQ receptor family member Ⅶ,PAQR7 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人絲蛋白抑制因子抑制因子進化枝3G(Serpina3g)ELISA試劑盒英文名稱：human serine/cysteine peptidase inhibitor clade A member 3G,Serpina3g ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人類似RIKEN cDNA A630077B13 基因 ELISA試劑盒英文名稱：human similar to RIKEN cDNA A630077B13 gene ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因 ELISA試劑盒英文名稱：human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人類似RIKEN cDNA 2610307008 基因 ELISA試劑盒英文名稱：human similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人類似RIKEN cDNA 2010109K09 基因 ELISA試劑盒英文名稱：human similar to RIKEN cDNA 2010109K09 gene ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人ras同源物基因家族成員b(RHOB)ELISA試劑盒英文名稱：human ras homolog gene family,memmber B,RHOB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人假定蛋白LOC677340 ELISA試劑盒英文名稱：human hypothetical protein LOC677340 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人假定蛋白LOC433328 ELISA試劑盒英文名稱：human hypothetical protein LOC433328 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88(MYD88)ELISA試劑盒英文名稱：human myeloid differentiation primary response gene 88,MYD88 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

人干擾活化基因205(Ifi205)ELISA試劑盒英文名稱：human interferon activated gene 205,Ifi205 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
冠狀動脈平滑肌細(xì)胞MAP3K14/NFkB Inducing Kinase NIK 絲裂原活化蛋白激3K14抗體規(guī)格: 0.2ml

Cullin 5/CUL5 血管加壓激活鈣啟動受體蛋白1抗體規(guī)格: 0.2ml

AQP8/Aquaporin 8 水通道蛋白8抗體規(guī)格: 0.2ml

SLC26A4 鈉碘單獨轉(zhuǎn)運蛋白SLC26A4抗體規(guī)格: 0.1ml

Granzyme K 顆粒K抗體規(guī)格: 0.2ml

SRGN/Chondroitin sulfate proteoglycan core protein 硫軟骨多糖核心蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml

14-3-3 zeta/delta 14-3-3 protein ζ/δ抗體規(guī)格: 0.1ml

AIFM3 凋亡誘導(dǎo)因子3抗體規(guī)格: 0.2ml