細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：腹腔主動脈平滑肌細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9780

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

人免疫核糖核(Irna)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Immune RNA,Irna ELISA Kit規格:96T/48T

人β內酰抑制劑(BLI)ELISA試劑盒 英文名稱：Human β-Lactamase inhibitors,BLI ELISA Kit規格:96T/48T

人α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒 英文名稱：Human α-galactoyl,Gal ELISA Kit規格:96T/48T

人αN已酰基葡糖(αNAG)ELISA試劑盒 英文名稱：Human αN-acetylglucosaminidase,αNAG ELISA Kit規格:96T/48T

人α2纖溶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒 英文名稱：Human α2-plasmin inhititor,α2-PI ELISA Kit規格:96T/48T

人煙酰腺二核磷(NADPH)ELISA試劑盒 英文名稱：人高香草(HVA) ELISA Kit規格:96T/48T

人鈣粘蛋白相關的神經受體1(CNR-1)ELISA試劑盒英文名稱：Human cadherln-related neuronal receptor1,CNR-1 ELISA Kit規格:96T/48T

人毛細血管擴張性共濟失調突變基因(ATM)ELISA試劑盒英文名稱：Human Ataxia telangiectasia mutated,ATM ELISA Kit規格:96T/48T

人芳香烴受體(AhR)ELISA試劑盒 英文名稱：Human aryl hydrocarbon receptor,AhR ELISA Kit規格:96T/48T

人特異性巨噬細胞武裝因子(SMAF)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Specifie Macrophage Arming Paetot,SMAF ELISA Kit規格:96T/48T

人促有絲分裂因子(MF/MPF)ELISA試劑盒 英文名稱：Human maturation promoting factor,MF/MPF ELISA Kit規格:96T/48T

人轉錄因子抗體-1(ATF-1)ELISA試劑盒英文名稱：Human activating transcription factor-1,ATF-1 ELISA Kit規格:96T/48T

人抗鼠抗體(HAMA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human antimous antibody,HAMA ELISA 規格:96T/48T

人鈣離子通道抗體(VGCC)ELISA試劑盒英文名稱：Human voltage-gated calcium channel,VGCC ELISA Kit規格:96T/48T

人溴脫氧核(BrdU)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Bromodeoxyuridine,BrdU ELISA Kit規格:96T/48T

人纖維母細胞表面抗原(FSP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Fibroblast surface protein,FSP ELISA Kit規格:96T/48T

人分泌性白細胞蛋白抑制因子(SLPI)ELISA試劑盒英文名稱：Human secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI ELISA Kit規格:96T/48T

人阿黑皮原(POMC)ELISA試劑盒英文名稱：Human pro-opiomelanocortin,POMC ELISA Kit規格:96T/48T
腹腔主動脈平滑肌細胞FMNL1  成蛋白相關蛋白1抗體規格: 0.2ml

GAGE7/Cancer/testis antigen family 4 member 7  腫瘤/睪丸抗原家族4亞型7抗體規格: 0.2ml

JAKMIP2/NECC1  JAK和微管相互作用蛋白2抗體（JAK和微管相互作用蛋白2）規格: 0.2ml

LRRC15  富含亮重復蛋白15抗體規格: 0.2ml

MAGEA10  黑色瘤相關抗原10抗體規格: 0.2ml

MAGEA11  黑色瘤相關抗原11抗體規格: 0.2ml

MAGEA12  黑色瘤相關抗原12抗體規格: 0.2ml

MAGEA2  黑色瘤相關抗原2抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。