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實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
產品名稱 | 分類 | 貨號 |
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10269 |
PCR技術的定量原理:?
擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的,隨著反應循環數的增加,最終PCR反應不再以指數形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產物已不再呈指數級的增加,PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據最終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存備用。
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
弗氏志賀菌分類學研究模式菌株: no食物,水提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: 2生長條件: 37℃
曲霉屬活性物質;退行性疾病模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: CM0014生長條件: 28C
弧菌致病微生物/日本對蝦弧菌病致病菌模式菌株: no生物樣/日本對蝦提供形式: 凍干物安全等級: 2培養基: 471生長條件: 36℃
球孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養基: 0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
氧化鐵鉤端螺菌生物浸礦模式菌株: no礦山性水中提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 718生長條件: 30℃
-224℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
#固氮菌益生菌模式菌株: no莖提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: 141生長條件: 32
微桿菌屬有機化工廢水處理。模式菌株: no化工污水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0841生長條件: 30℃
猴頭菇培養基: CM0017用于食用菌。提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 礦物油法
副豬嗜血桿菌生長條件: 37培養基: 183提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法;
白色假絲酵母菌培養基: CM0013模式菌株: no痰提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 36℃ -80℃冰箱凍結法
新城疫病實驗研究其生物學活性,并進一步從基因水平上進行分析。同時,篩選合適的疫苗株制備新型疫苗。模式菌株: no病雞提供形式: 凍結物安全等級: 2培養基: 0生長條件: 37
-225℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
蜜蜂生球擬酵母培養基: CM0375以玉米為原料發酵甘油。提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法
諾卡氏菌屬菌種降血脂模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1培養基: CM0027生長條件: 28C
海綿假單胞菌1.海洋石油污染生物修復; 2.生物活性物質篩選模式菌株: no水樣/下層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: 821生長條件: 25℃
BairdParkerAgarMedium
M湯(MHB) 250(g) incubation media M湯(MHB) 250(g)
四硫磺鈉亮綠增菌液 2X5支 含液2ml/支和煌綠1ml/支,2支添加于100mL(023031)中配成TTB
溴化十六烷基三瓊脂培養基CetrimideAgarMedium綠膿假單胞菌的分離培養
改良磷鹽緩沖液PSB 250g 小腸結腸炎耶爾森氏菌增菌培養
NZYM瓊脂 NZYM Agar 100克 BR
NZYM肉湯 NZYM Broth 100克 BR
NZM瓊脂 NZM Agar 100克 BR
NZM肉湯 NZM Broth 100克 BR
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒MLCB寒天培地顆粒規格:250g用途:用于沙門氏菌分離培養
XLT4瓊脂規格:250g用途:用于食品中致病菌,特別是沙門氏菌分離培養
BCYE-CYS瓊脂基礎規格:100g用途:用于軍團菌的選擇性分離培養(ISO標準)
酪蛋白葡萄糖肉湯規格:250g用途:用于霉菌、酵母菌等的增菌培養
酵母浸粉規格:250g用途:培養基原材料,提供細菌生長所需的維生素B族
鳥氨脫羧酶肉湯規格:1ml*20用途:用于生化鑒定
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