細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：豬髖動脈內皮細胞    

產品英文：PIEC

貨號：FS-01X9745

細胞培養條件：1640+10%FBS+1%P/S

生長狀態：貼壁生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人腫瘤特異生長因子/腫瘤相關因子(TGSF)ELISA試劑盒英文名稱：Human Tumor Specific Growth Facter/tumor supplied group of factor,TGSF ELISA Kit規格:96T/48T

人色上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒英文名稱：Human pigment epithelium-derived factor,PEDF ELISA Kit規格:96T/48T

人克拉拉細胞蛋白(CC16) ELISA試劑盒 英文名稱：Human Clara cell protein,CC16 ELISA Kit 規格:96T/48T

人黑色細胞抗體(MC Ab)ELISA試劑盒英文名稱：Human melanocyte antibody,MC Ab ELISA Kit規格:96T/48T

人細胞周期D3(Cyclin-D3)ELISA試劑盒英文名稱：Human Cyclin-D3 ELISA Kit規格:96T/48T

人細胞周期D2(Cyclin-D2)ELISA 英文名稱：Human Cyclin-D2 ELISA Kit規格:96T/48T

人細胞周期D1(Cyclin-D1)ELISA試劑盒英文名稱：Human Cyclin-D1 ELISA Kit規格:96T/48T

人微量轉鐵蛋白(MTF)ELISA試劑盒英文名稱：Human microtransferrinuria,MTF ELISA Kit規格:96T/48T

人鱗狀上皮細胞癌抗原2(SCCAg-2)ELISA試劑盒英文名稱：Human Squamous Cell Carcinoma Antigen 2,SCCAg 2 ELISA Kit規格:96T/48T

人癌胚抗原(CEA/CD66)ELISA試劑盒英文名稱：Human carcinoembryonic antign,CEA ELISA Kit規格:96T/48T

人肺表面活性物質相關蛋白D(SP-D)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Pulmonary surfatcant-associated protein D,SP-D ELISA Kit規格:96T/48T

人肺表面活性物質相關蛋白C(SP-C)ELISA試劑盒英文名稱：Human Pulmonary surfatcant-associated protein C,SP-C ELISA Kit規格:96T/48T

人肺表面活性物質相關蛋白B(SP-B)ELISA試劑盒英文名稱：Human Pulmonary surfatcant-associated protein B,SP-B ELISA Kit規格:96T/48T

人肺炎支原體抗體(MP-Ab)ELISA Ki英文名稱：Human Mycoplasma pneumoniae antibody,MP-Ab ELISA Kit規格:96T/48T

人肺炎衣原體抗體(Cpn-Ab)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Chlamydia pneumoniae antibody,Cpn-Ab ELISA Kit規格:96T/48T

人肺耐藥蛋白(LRP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Lung resistance-related protein,LRP ELISA Kit規格:96T/48T

人α1抗胰(AACT)ELISA試劑盒英文名稱：Human Alpha1 Antichymotrypsin,AACT ELISA Kit規格:96T/48T

人幽門螺桿菌細胞毒相關基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)ELISA試劑盒英文名稱：Human Helicobacter pylori cytotoxin-associated gene A protein IgG,HP-CagA-IgG ELISA Kit規格:96T/48T
豬髖動脈內皮細胞EZH1/Histone-lysine N-methyltransferase EZH1  組蛋白賴N-甲基EZH1抗體規格: 0.2ml

phospho-KMT6/EZH2(Thr487)  磷化抑癌蛋白EZH2抗體規格: 0.1ml

SKALP/Elafin  彈性蛋白抑制劑抗體規格: 0.2ml

Epsti1/Epithelial Stromal Interaction 1  上皮間質相互作用蛋白1抗體規格: 0.2ml

EIG121  雌誘導基因121蛋白抗體規格: 0.2ml

FAM129A/Cell growth inhibiting gene 39 protein  細胞生長抑制基因39蛋白抗體規格: 0.2ml

FOLH1B  細胞生長抑制蛋白26抗體（前列腺特異性膜抗原樣蛋白）規格: 0.2ml

GCET2  生發中心B淋巴細胞相關蛋白2抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。