細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：EBV 轉化的絨猴白細胞    

產品英文：B95-8

貨號：FS-01X9746

細胞培養條件：1640+10%FBS+1%P/S  

生長狀態：懸浮生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人粘蛋白/粘液7(MUC7)ELISA試劑盒英文名稱：Human Mucin-7,MUC7 ELISA Kit規格:96T/48T

人粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒英文名稱：Human Mucin-5 subtype AC,MUC5AC ELISA Kit規格:96T/48T

人轉/谷丙轉(ALT/GPT)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Alanine Aminotransferase,ALT/GPT ELISA Kit規格:96T/48T

人天轉/谷草轉(GOT/GPT)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Aspartate aminotransferase,GOT/GPT ELISA Kit規格:96T/48T

人纖維連接相關抗原(FRA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human fibronection related antigen,FRA ELISA Kit規格:96T/48T

人胃泌細胞抗體(GCA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human gastrin cell antibody,GCA ELISA Kit規格:96T/48T

人肝輔因子Ⅱ(HCⅡ)ELISA試劑盒 英文名稱：Human heparin cofactor Ⅱ,HCⅡELISA Kit規格:96T/48T

人透明質結合蛋白(HABP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Hya]uronate binding protein,HABP ELISA Kit規格:96T/48T

人細胞毒相關蛋白A(CagA)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Cytotoxin-associated protein,CagA ELISA Kit規格:96T/48T

人胃泌釋放多(GRP)ELISA試劑盒 英文名稱：Human gastrin-reliasing peptide,GRP ELISA Kit規格:96T/48T

人胃泌釋放前體(ProGRP)ELISA試劑盒英文名稱：Human pro-gastrin-releasing peptide, ProGRP ELISA Kit規格:96T/48T

人促胰液/胰泌(Secretin)ELISA試劑盒英文名稱：Human Secretin ELISA Kit規格:96T/48T

原激活(TAP)ELISA 英文名稱：Human trypsinogen activation peptide,TAP ELISA Kit規格:96T/48T

人內皮型一氧化氮合成3(eNOS-3)ELISA試劑盒英文名稱：Human α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit規格:96T/48T

人胰淀(Amylin)ELISA試劑盒英文名稱：Human Amylin ELISA Kit規格:96T/48T

人血管活性腸(VIP)ELISA試劑盒英文名稱：Human Motilin,MTL ELISA Kit規格:96T/48T

人NOGO-A抗體(Nogo-A Ab)ELISA試劑盒英文名稱：Human anti-Nogo-A antibody,NOGO-A Ab ELISA Kit規格:96T/48T

人抗組織轉抗體IgA(tTG-IgA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-tissue tranGSlutaminase IgA,tTG-IgA ELISA Kit規格:96T/48T
EBV 轉化的絨猴白細胞HDGF  肝癌衍生生長因子抗體（高遷移率族蛋白1樣蛋白2抗體）規格: 0.2ml

HOXB2  同源盒蛋白B2抗體規格: 0.1ml

HOXB8  同源盒蛋白B8抗體規格: 0.2ml

HSPA6  熱休克蛋白70家族蛋白6抗體規格: 0.2ml

Id1  DNA結合抑制因子1抗體規格: 0.2ml

LAPTM4B  溶體蛋白跨膜β4抗體規格: 0.2ml

LDOC1/BCUR1  癌癥亮拉鏈下調因子1抗體規格: 0.2ml

LOXL2  賴酰氧化相關蛋白2抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。