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ROS線粒體活性氧產生速率檢測試劑盒熒光法

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所  在  地上海市

更新時間:2022-04-11 12:17:02瀏覽次數:176次

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貨號 FS-01S63297
ROS線粒體活性氧產生速率檢測試劑盒熒光法公司正在銷售的產品:IV型膠原蛋白/4型膠原蛋白/膠原蛋白4抗體5-HTT/SERT/FITC 熒光標記5-羥色轉運蛋白抗體IgG
煙型乙酰膽受體B2抗體8-OHdG/FITC 熒光標記兔抗8-羥脫氧鳥苷蛋白抗體IgG

產品屬性:

產品名稱

規格

檢測方法

貨號

ROS線粒體活性氧產生速率檢測試劑盒熒光法

100管/96樣

熒光法

FS-01S63297

商品介紹:

測定意義

活性氧(Reactive oxygen species, ROS)包括超氧自由基、過氧化氫、及其下游產物過氧化物和羥化物等,研究表明,機體95%以上的活性氧(ROS)都來自于線粒體,其失衡所致的氧化應激與細胞生長增殖、發育分化、衰老和凋亡以及許多生理和病理過程有關。

正常情況下,細胞內抗氧化防御系統與氧自由基處于平衡狀態,細胞內活性氧(ROS)水平維持在較低的生理范圍;在病理情況下,細胞內抗氧化系統與氧自由基的平衡被打破,細胞內活性氧水平過多,就可破壞線粒體酶類、脂類和核酸,使機體出現氧化應激,同時,活性氧還可攻擊線粒體DNA產生氧化損傷,導致線粒體ATP合成減少、線粒體膜電位破壞等結構和功能變化。

因此,通過檢測活性氧的變化來判斷線粒體的功能是否正常具有重要意義。

測定原理:

熒光探針-還原型二氯熒光素 (2', 7'-dichlorodihy drofluorescin diacetate, DCFH-DA)可擴散通過線粒體膜,在線粒體內被酯酶水解,形成無熒光的DCFH,DCFH迅速與ROS反應生成熒光物—氧化型二氯熒光素(2', 7'-dichlo rofluorescin, DCF)。 根據上述原理設計了利用熒光法直接定量檢測線粒體ROS產生速率的方法。將熒光強度隨時間變化的數據點擬合,線性回歸直線斜率與ROS產生的速率呈正比。

需自備的儀器和用品:

多功能酶標儀、恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水。

樣本前處理步驟:
樣本處理前須知

處理任何樣本時,都必須注意:

(1) 實驗中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭(2)實驗前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時對實驗器具進 行清潔,避免污染干擾實驗結果。

(a)組織樣品處理方法:

1、 稱取5±0.05g組織樣品于50ml離心管中,先加入3ml已稀釋好的樣品提取液震蕩2min;再加入10ml乙腈,充分震蕩5min,

2、 加入2g中性氧化鋁;震蕩2min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

3、 取6ml上清液于干凈離心管中,加入5ml二氯甲烷震蕩3min ,室溫4000r/min以上,離心10min;;

4、 取下層清澈液體于玻璃管中,加入20ul氧化劑混勻,在56℃條件下氮氣或空氣流吹至*干燥;

5、 加入1ml復溶液,充分溶解干燥殘留物。

6、 取100ul 上清液與100ul 已稀釋好的復溶液充分混合30s,

7、 取50ul進行分析。

樣本稀釋倍數: 1倍

(b)水樣品處理方法:

1、取50ul 上清液與450ul 已稀釋好的復溶液充分混合30s,

2、取50ul進行分析。

樣本稀釋倍數:10倍

 

下列是公司正在出售的產品:

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ROS線粒體活性氧產生速率檢測試劑盒熒光法溴代正壬烷 97%二二甲酯 98%ELAVL1/HuR peptide  ELAVL1/HuR多肽抗原

溴代正癸烷 AR,98%二二乙酯 99%Emp1 (epithelial membrane protein 1)  表皮膜蛋白1抗原

溴代十二烷 98%二二異酯 99%sFRP-4(Secreted frizzled-related protein 4; Frizzled protein, human endometrium)  抗內膜抗原

1-溴十八烷 97%雙酮烯酰 99%Endostatin  內皮抑/內皮他丁抗原

2- 98%三乙酯 97%EpCAM(Epithelial cell adhesion molecule)  上皮粘附分子/表皮粘附分子(多肽)

1-溴-2-氯乙烷 98%乙酯 CP,98%   EpCAM/CD326(Epithelial cell adhesion molecule)  上皮粘附分子/表皮粘附分子抗原

溴乙 AR,98.5%(GC)乙乙酯 99%E.coli O6 (Escherichia coli O6)  E.coli O6大腸桿菌菌體蛋白

溴代十六烷 97%甲酯 AR,99.0%EPEC/E.coli(enteropathogenic E.coli,EPEC)  普通大腸埃希菌菌體蛋白(非致病性)
實驗通用規則:
1、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。

2、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。

3、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發。

4、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

5、實驗時,要使底物避光保存。

6、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加*。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。

7、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復到室溫,以使結果更穩定。

8、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。

9、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標準品時。

10、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。


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