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貨號	FS-X10322

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：IPI3K和mTOR抑制劑(BEZ235)

英文名稱：BEZ235

產品規格：10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

貨號：FS-X10322

產品介紹:

英文名稱：BEZ235

產品規格：10mg|50mg|100mg|200mg|500mg

BEZ235是一種雙重的泛class IPI3K和mTOR抑制劑，作用于p110α/γ/δ/β和mTOR，IC50分別為4nM/5nM/7nM/75nM和20.7nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：915019-65-7

別名：NVP-BEZ235

純度：98.83%

分子量：469.54

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

紅球菌轉化因子樣蛋白4抗體Human ONECUT1 生存(survivin)

高山被孢霉NADH復合體5抗體Human OPA3 腎小球組織糖基化終末產物(GTE-AGE)

動物雙歧桿菌乳亞種肌微管1抗體Human OPTN 腎損傷分子1(Kim-1)

櫟小皮傘髓性白血病蛋白1抗體Human OFD1 腎(Renin)

Au（黑木耳）磷化絲裂原活化蛋白激1抗體Human OGT 腎上腺髓質前體(Pro-ADM)

克魯斯假絲酵母組織相容性復合體2抗體Human OIP5 腎上腺髓質(ADM)

變位艾美耳球蟲磷化雷帕霉靶蛋白抗體Human OLFM1(Olfactomedin-1) 腎上腺能a1A受體(ADRA1A)

膠凍樣類芽孢桿菌甲基化CpG結合蛋白2抗體Human OLFM2 腎上腺(EPI)

梨生囊殼孢磷化雷帕霉靶蛋白抗體Human OLFM3 腎上腺皮質抗體(ACA)

擬可可毛球二孢NADH復合體6抗體Human OLIG2(Oligodendrocyte transcription factor 2) 蛋白(nephrin)

黑曲霉黑色瘤相關抗原11抗體Human OMA1 腎(RNLS/MAO-C)

灰綠犁頭霉同源盒基因Msx2抗體Human ODF2L 神經元凋亡抑制蛋白(NAIP)

香菇磷化絲/蘇蛋白激MARK4抗體Human OMCG1 神經營養因子4(NT-4)

圍小叢殼膜型基質金屬蛋白胞質尾結合蛋白1抗體Human OCTN2 神經營養因子3(NT-3)

蘋果盤二孢周期調節蛋白P95抗體Human OCRL 神經型一氧化氮合成(nNOS)

釀酒酵母自噬微管相關蛋白輕鏈β3抗體Human DNAJB1(DnaJ homolog subfamily B member 1) 神經粘著分子(NRCAM)

ATCC7830資源名稱: 德氏乳桿菌乳亞種質量規格：>98.0%(HPLC)蛻皮激

塔賓曲霉Aspergillus│tubingensis 質量規格：>98.0%(T)根皮

AS2.338資源名稱: 異常漢遜酵母質量規格：>98.0%(HPLC)(T)梓
IPI3K和mTOR抑制劑(BEZ235)大腸埃希氏O抗原微量凝集定型血清診斷液甲戊酯p53誘導基因3

大腸桿 N-α-羰基苯氧基-D-精Periostin

人參土成對桿辛戊酯P糖蛋白;滲透性糖蛋白

白色金針菇 3-甲基-2-乙酯P物質

孟氏假單胞 4-乙酰乙乙酯P選擇

大腸埃希己己酯Ras同源基因家族成員A

雞傷門氏疊氮乙乙酯Rho關聯含卷曲螺旋蛋白激1

微小桿四氫糠乙酯Rho關聯含卷曲螺旋蛋白激2

串珠鐮孢 2-氟-5-甲R-脊椎蛋白1

交替紅色桿屬 2(3H)-4-氟苯并噻唑酮S100B蛋白

矮被孢霉鄰乙酰氨基對S100蛋白

金耳 6-氟-2(3氫)苯噻唑酮S100鈣結合蛋白A8;A9復合物

釀酒酵母鄰乙酰氨基對SKA2

豇豆慢生根瘤苯炔Syndecan-1;CD138

藤倉鐮孢 6,8-二溴-咪唑[1,2-A]吡Tamm-Horsfall蛋白
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)