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貨號	FS-X10325

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：ROCK-I和ROCK-II抑制劑(Y-27632)

英文名稱：Y-27632

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10325

產品介紹:

英文名稱：Y-27632

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

Y-27632是一種ATP競爭性的ROCK-I和ROCK-II抑制劑，作用于ROCK-I和ROCK-II，Ki分別為220nM和300nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：146986-50-7

純度：99.65%

分子量：247.34

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

葡萄生擬莖點霉菌肌肉特異性環指蛋白3抗體Human NUP50 山梨脫氫(SDH)

芽孢桿菌屬磷化原癌基因c-Met相關酪激抗體Human NUP205 沙眼衣原體抗原(CT)

釀酒酵母絲裂原活化蛋白激13抗體Human NUDT6 沙眼衣原體抗體(CT)

釀酒酵母多纖毛蛋白抗體Human NUP53 沙眼衣原體蛋白樣活性因子(CPAF)

枯草芽孢桿菌肌管相關蛋白8抗體Human NUMBL 沙眼衣原體(CT)

吉氏芽孢桿菌巨噬甘露糖受體2抗體Human PYGB(Glycogen phosphorylase, brain form) 沙漠猬因子(DHH)

不動桿菌周期G1的相互作用蛋白抗體Human NUDT8 殺傷凝集樣受體(KLR)

芽胞桿菌主導控制樣蛋白3抗體Human NUP107 殺傷免疫球蛋白樣受體(KIR)

枯草芽孢桿菌斯氏亞種絲裂原活化蛋白激MKK3抗體Human NUP133 殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)

脫葉鏈霉菌MYSM1抗體Human NUP160 殺菌肽B(CecB)

新月彎孢單羧轉運蛋白-1抗體Human F11(Coagulation factor XI) 殺菌肽(cecropin)

巴斯德畢赤酵母微管相關蛋白1A抗體Human NUP153 色上皮衍生因子(PEDF)

漢遜德巴利酵母中期因子/肝結合生長因子抗體Human NUP50 色酰tRNA合成(WARS)

曲霉鹽皮質激受體抗體Human NUP205 色羥化(TPH)

類馬鏈球菌促黑激α抗體Human NUDT6 三角形四肽重復蛋白1(TTC1/TPR1)

桃中田殼小圓孢菌Myc基因相關X因子抗體Human NUP53 狀腺原(T3)

ATCC53103資源名稱: 鼠李糖乳桿菌質量規格：螯合劑五味子乙

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質量規格：螯合劑五味子酯

銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質量規格：>98.0%(T)五味子酯乙
ROCK-I和ROCK-II抑制劑(Y-27632)固氮離子交換樹酯，1×4β干擾

黃赭色鏈霉噻吩-2-甲亞銅β-內啡肽

雙孢蘑菇香葉基酮β葡萄糖

鹿角芝 3,6,9,12-Tetraoxatetradecane-1,14-diamineβ-神經生長因子

黃青霉脫氧核糖核鈉鹽β位淀粉樣前體蛋白裂解1

腐皮殼 4-(羥基)苯氧基乙β血小板球蛋白;β血栓環蛋白

副豬嗜血桿 1-氨基-1-環烷羧鹽鹽γ氨基丁

多帶革孔 L-氨酰甘γ氨基丁A型受體

卡爾斯伯酵母 (1R,2R)-(-)-N,N'-二甲基環己烷-1,2-二γ-氨基丁受體

隆紋黑蛋巢 2-甲基啉γ干擾

葡萄球屬 2,4-二苯γ干擾誘導單核因子

糞腸球四乙基化，一水γ谷氨酰轉肽

勝利油田鹽單胞乙炔鋰乙二復合物γ谷氨酰轉移

脊孢糖多孢 (二乙基)膦δ 氨基酮戊

毛栓布枯油δ氨基乙酰脫水
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)