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貨號	FS-X10631

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：脫乙酰化酶抑制劑(HDAC抑制劑)(TMP269)

英文名稱：TMP269

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10631

產品介紹:

TMP269是一種有效的，選擇性的脫乙酰化酶(HDAC)抑制劑，能夠抑制HDAC4/HDAC5/HDAC7/HDAC9，IC50值分別為157nM，97nM，43nM和23nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1314890-29-3

純度：98.42%

分子量：514.52

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

金龜子綠僵菌PE-Cy3標記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5B Antibody肝型脂肪結合蛋白(FABP1)

白齒菌PE-CY5標記的小鼠抗人IgMAnti-STAT5B Antibody肝生長因子受體(HGFR)

韋梅擬盤多毛孢 APC標記的小鼠抗人IgMAnti-STAT6 Antibody肝癌相關蛋白1(HCRP1)

暗擬莖點霉Alexa Fluor 350標記的小鼠抗人IgMAnti-STAT6 Antibody肝2(HPA2)

纖維単胞菌Alexa Fluor 488標記的小鼠抗人IgMAnti-STAU2 Antibody肝(HPA)

總狀毛霉Alexa Fluor 555標記的小鼠抗人IgMAnti-STAT6 Antibody肝結合性表皮生長因子(HBEGF)

根霉Alexa Fluor 647標記的小鼠抗人IgMAnti-STIM1 Antibody(PB0461)肝受體同源物1(LRH1)

嗜熱鏈球菌PE-Cy5.5標記的小鼠抗人IgMAnti-STAU1 Antibody肝腎骨堿性磷(ALPL)

膨大彎頸霉PE-Cy7標記的小鼠抗人IgMAnti-STAU1 Antibody肝配蛋白B3(EFNB3)

蠟狀芽孢桿菌堿性磷（AP）標記的小鼠抗人IgMAnti-STIP1 Antibody肝配蛋白B2(EFNB2)

釀酒酵母膠體金標記的小鼠抗人IgMAnti-STK3/MST-2 Antibody肝配蛋白B1(EFNB1)

大腸埃希氏菌Cy7標記的小鼠抗人IgMAnti-STMN1 Antibody肝配蛋白A受體3(EPHA3)

變幻青霉PE標記的小鼠抗人IgMAnti-STK11 Antibody肝配蛋白A受體10(EPHA10)

Micromonospora羅丹明標記的小鼠抗羊IgGAnti-STRA8 Antibody肝配蛋白A受體1(EPHA1)

綠色木霉菌膠體金標記的小鼠抗羊IgGAnti-STUB1 Antibody肝配蛋白A5(EFNA5)

Klebsiella pneumoniae堿性磷（AP）標記的小鼠抗羊IgGAnti-STRA8 Antibody肝配蛋白A4(EFNA4)

絲/蘇激蛋白PIM1+PIM3抗體抗金屬伯克霍爾德氏菌前列腺上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物

PUM2蛋白抗體尕海湯飛凡菌皮膚表皮角質形成細胞和腫瘤原代細胞提取物

蛋白體PSMα4/20SProteasomeα4抗體假交替單胞菌屬小腦顆粒細胞和腫瘤原代細胞提取物

Phocein蛋白抗體普通青霉結腸上皮細胞和腫瘤原代細胞提取物
脫乙酰化酶抑制劑(HDAC抑制劑)(TMP269)假單胞屬 2,5-己二酮腫瘤壞死因子α

豌豆根瘤 (S)-吡咯烷-3-甲甜菜堿

毛頭鬼傘，雞腿菇 (R)-吡咯烷-3-甲骨鈣

釀酒酵母甲鎂骨橋

緊密假諾卡氏 2-甲氧基乙促性腺釋放

梭 (2-)肼Bcl-2相關X蛋白

托姆青霉 (R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異基吡B瘤因子2

泛枝芽胞桿 N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-組五氟苯基酯色C

腫塊芽孢桿屬 (R)-1-Boc-3-羥基吡咯烷半胱蛋白3

栗疫 N-Fmoc-N'-Boc-L-鳥半胱蛋白6

金針菇 N-Boc-4-羥基半胱蛋白7

嗜中溫寒冷桿二氫羅丹明123半胱蛋白8

釀酒酵母 Dichlorobis(2-(diisopropylphosphino)-乙)釕(II)半胱蛋白9

銀白離褶傘 (1S,2S)-2-[(4R,11bS)-3,5-dihydro-4H-dinaphtho[2,1-熱休克蛋白90

果生鏈核盤 BOC-L-環己基甘骨成型蛋白受體1B
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)