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產地 | 國產 | 加工定制 | 是 |
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適用領域 | 科研 | 貨號 | FS-01X9761 |
細胞培養操作規程:
一.培養基及培養凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優質胎牛血清,10%。
2)培養條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現用現配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
產品屬于:
產品名稱:肺動脈外膜成纖維細胞
產品規格:5×105
貨號:FS-01X9761
產品類型:原代細胞
單位:T25/瓶
提供細胞鑒定:提供免疫熒光鑒定報告
保存培養溫度(℃):37
運輸溫度(℃):常溫
細胞培養的優點:
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中,根據要求可始終保持細胞活力,并可長時間監控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態、結構、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養一定代數后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術:如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。 |
注意事項:
1. 接收到細胞,肉眼觀察細胞培養基顏色,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數拍照(建議收到時的培養瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。 2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。 3.嚴格無菌操作,打開細胞培養瓶。 4.將細胞培養瓶內的培養基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養基培養細胞)。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。 6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。 7.換新的細胞培養瓶,37℃,5%CO2培養。 |
人1,5-脫水葡萄糖/1,5-脫水山梨(1,5-AG)ELISA試劑盒英文名稱:Human 1,5-anhydroglucitol,1,5-AG ELISA Kit規格:96T/48T
人N端中段骨鈣(N-MID-OT)ELISA試劑盒英文名稱:Human N-MID Osteocalcin,N-MID-OT ELISA Kit規格:96T/48T
人低密度脂蛋白受體相關蛋白6(LRP-6)ELISA試劑盒英文名稱:Human low-density lipoprotein-receptor-related protein,LRP-6 ELISA Kit規格:96T/48T
人極低密度脂蛋白受體(VLDLR)ELISA試劑盒英文名稱:Human very low density lipoprotein receptor,VLDLR ELISA Kit規格:96T/48T
人低密度脂蛋白受體(LDLR)ELISA試劑盒英文名稱:Human very low density lipoprotein receptor,VLDLR ELISA Kit規格:96T/48T
人過氧化物體增殖因子活化受體γ( PPAR-γ)ELISA試劑盒英文名稱:Human Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA Kit規格:96T/48T
人神經膠質纖維性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒英文名稱:Human glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 規格:96T/48T
人15脂加氧(15-LO/LOX)ELISA試劑盒英文名稱:Human 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit規格:96T/48T
人膽固酯轉移蛋白(CETP)ELISA試劑盒英文名稱:Human glial fibrillary acidic protein,GFAP ELISA Kit 規格:96T/48T
人糖原磷化同工II(GP-II)ELISA試劑盒英文名稱:Human Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit規格:96T/48T
人糖原磷化同工MM(GP-MM)ELISA試劑盒英文名稱:Human Glycogen phosphorylase MM,GP-MM ELISA Kit規格:96T/48T
人糖原磷化同工BB(GP-BB)ELISA試劑盒英文名稱:Human Glycogen phosphorylase BB,GP-BB ELISA Kit規格:96T/48T
人吡啶交聯物(PY)ELISA試劑盒英文名稱:Human pyridinium crosslink/PyriLinks,PY ELISA Kit規格:96T/48T
人骨橋(OPN)ELISA試劑盒英文名稱:Human Osteopontin,OPN ELISA Kit規格:96T/48T
人γ基丁(GABA)ELISA試劑盒 英文名稱:Human Gamma-aminobutyric acid,GABA ELISA Kit 規格:96T/48T
人P物質受體(SP-R)ELISA試劑盒英文名稱:Human substance P receptor,SP-R ELISA Kit規格:96T/48T
人脂蛋白磷脂A2(Lp-PL-A2)ELISA試劑盒英文名稱:Human lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PL-A2 ELISA Kit規格:96T/48T
人內皮脂肪(EL)ELISA試劑盒英文名稱:Human Endothelial lipase,EL ELISA Kit規格:96T/48T
肺動脈外膜成纖維細胞AQP0/MIP26 水通道蛋白0抗體規格: 0.1ml
TYK2 非受體酪蛋白激2抗體規格: 0.1ml
HRH1 組受體H1抗體規格: 0.1ml
HRH2 組受體H2抗體規格: 0.1ml
phospho-HRH1(Ser398) 磷化組受體H1抗體規格: 0.1ml
HOXA11 同源盒蛋白HOXA11抗體規格: 0.1ml
HOXA9 同源盒蛋白HOXA9抗體規格: 0.1ml
HOXB5 同源盒蛋白HOXB5抗體規格: 0.1ml
實驗報告:
一、分離與培養:
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;
5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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