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| 貨號 | FS-X10540 |
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產品介紹:
EGF816是一種新穎的EGFR抑制劑，對EGFR(L858R/790M)突變體的Ki和Kinact值分別為31nM和0.222min?1。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：1508250-71-2 別名：Nazartinib 純度：99.85% 分子量：495.02 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱：EGFR抑制劑(EGF816)
英文名稱：EGF816
產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10540
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
蠟狀芽孢桿菌泛結合E2蛋白A抗體Anti-LCN2 Antibody腎腫瘤抗原(RAGE)
美澳型核果褐腐病菌泛結合E2O抗體Anti-LCN2 Antibody腎小球蛋白(GLMN)
假臍菇泛蛋白連接J2抗體Anti-LCN2 Antibody腎損傷分子1(Kim1)
枯草芽孢桿菌泛蛋白連接M抗體Anti-LCN2 Antibody(PB0643)腎(REN)
肉色迷孔菌泛蛋白連接W抗體Anti-LCP1 Antibody腎上腺髓質受體(AMR)
普利茅斯沙菌同源蛋白UNCX抗體Anti-LDHA Antibody(PB1129)腎上腺髓質2(ADM2)
魯考弗美奇酵母UL16結合蛋白3抗體Anti-LDHB Antibody(PB1130)腎上腺能受體α2C(ADRα2C)
檸檬兩面神菌去泛化22抗體Anti-LEP Antibody腎上腺能受體α1A(ADRα1A)
深藍紫色桿菌RNA聚合I抗體Anti-LEP Antibody腎母瘤蛋白1(WT1)
根瘤菌尿鹽重吸收轉運子1抗體Anti-LDLR Antibody腎(RNLS)
蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種囊泡轉運蛋白Use1抗體Anti-LEP Antibody腎連蛋白(NPNT)
Paecilomyces formosus上游結合蛋白1抗體Anti-LEP Antibody腎結核蛋白4(NPHP4)
福氏志賀氏菌內質網膜蛋白UNC93B抗體Anti-LGALS1 Antibody腎膠原凝集1(CLK1)
金頂側耳神經突起誘導因子受體UNC5B抗體Anti-LEPR Antibody腎胱7(NPHP7)
總狀共頭霉神經突起生長誘導因子受體UNC5B抗體Anti-LEP Antibody腎胱5(NPHP5)
層出鐮刀菌神經突起生長誘導因子受體UNC5D抗體Anti-LGALS1 Antibody型胱癥蛋白(CTNS)
肌脂蛋白抗體長雙歧桿菌嬰兒亞種大鼠主動脈內皮細胞
鞘激2抗體宋內氏志賀氏菌大鼠冠狀動脈內皮細胞
絲/蘇蛋白激3抗體紫色色桿菌（平板）大鼠心肌細胞
α維生E相關蛋白抗體光滑假絲酵母大鼠腎小球內皮細胞
EGFR抑制劑(EGF816)大豆莖潰瘍 1-Boc-3-基-4-吡咯烷酮H5N1
泛養副球 N-芴甲氧羰基-L-4-苯脂肪結合蛋白
百脈根中間根瘤 Fmoc-3-(3-吡啶基)-L-外脂肪結合蛋白
赭色擲孢酵母 Z-4-Fluoro-Phe-OHα3S轉移
球形阜孢 4 -(4、5二苯2咪唑基)胰高血糖樣肽1
枯草芽孢桿 1-溴-2-(二氟甲氧基)苯可溶性白介2受體
地衣芽孢桿 2-(三氟甲氧基)苯甲同型半胱
類干酪乳桿類干酪亞種 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-十三氟辛基烯酯卵清蛋白
嗜鹽喜鹽芽胞桿 2-溴-4-(三氟甲基)吡啶谷轉氨
窄食單胞 4--2-(三氟甲氧基)苯谷草轉氨
串珠鐮孢 3-氨基-5-環基-1H-吡唑滑液囊支原體抗體
約氏不動桿 2,5-二氟苯肼鹽鹽球蛋白
固氮 3-氨基異噁唑溶血
韓國游動微 乙酰酮鋯堿性磷
單格孢屬 2-溴-5-苯甲腫瘤壞死因子受體1
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