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貨號	FS-X10373

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：BTK抑制劑(Acalabrutinib)

英文名稱：Acalabrutinib

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10373

產品介紹:

英文名稱：Acalabrutinib

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

Acalabrutinib是一種新穎的，有效的，選擇性的BTK抑制劑，在人全血CD69B細胞激活試驗中，IC50和EC50分別為3nM和8nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1420477-60-6

別名：ACP-196

純度：98.74%

分子量：465.51

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黃蓋小脆柄菇神經損傷誘導蛋白1抗體Human FABP3(Fatty Acid Binding Protein 3, Muscle and Heart) 基質衍生因子1α(SDF-1α)

芝麻專化型神經損傷誘導蛋白2抗體Human cTnI(Cardiac Troponin-I) 基質衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)

接骨木鐮孢絲/蘇蛋白激Nek3抗體Human Myo(Myoglobin) 基質衍生因子1a(SDF1A)

雞傷門氏菌中心體相關蛋白激Nek2抗體Human CK-MB(Creatine Kinase MB) 基質裂解(ST3)

布氏白僵菌神經顆粒抗體Human NT-proBNP(N-Terminal Pro-Brain Natriuretic Peptide) 基質裂解(ST2)

謝瓦氏曲霉神經肽S抗體Human GHRL(Ghrelin) 基質裂解(ST1)

蘋果鏈格孢神經肽S抗體Human WISP1/CCN4(WNT1-inducible-signaling pathway protein 1) 基質裂解蛋白/基質溶(MAT)

釀酒酵母神經肽S受體1/G蛋白偶聯受體154抗體Human EPO(Erythropoietin) 基質金屬蛋白組織抑制因子1(TIMP-1)

阿布拉鏈霉菌G蛋白偶聯受體66/神經調節肽U受體1抗體Human TIMP-1(Metalloproteinase inhibitor 1) 基質金屬蛋白抑制因子4(TIMP-4)

異樣纖維單胞菌G蛋白偶聯受體FM4/神經調節肽U受體2抗體Human IGFBP-4(Insulin-like growth factor-binding protein 4) 基質金屬蛋白抑制因子3(TIMP-3)

瑞士乳桿菌神經肽S抗體Human Lptn/XCL1(Lymphotactin) 基質金屬蛋白抑制因子2(TIMP-2)

橙色桿菌屬腎上腺發育不全相關蛋白抗體Human TIMP-3(Metalloproteinase inhibitor 3) 基質金屬蛋白抑制因子1(TIMP-1)

貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型型肝炎病非結構蛋白5A反式激活蛋白9抗體Human TIMP-2(Metalloproteinase inhibitor 2) 基質金屬蛋白9/明膠B(MMP-9/Gelatinase B)

豌豆根瘤菌Noxa蛋白抗體Human TIMP-4(Metalloproteinase inhibitor 4) 基質金屬蛋白9(MMP-9)

氧化節桿菌P53誘導凋亡抑制蛋白抗體Human TF/F3(Tissue factor) 基質金屬蛋白8/中性粒膠原(MMP-8)

細孢毛霉磷化酪激B抗體Human LY75(Lymphocyte antigen 75) 基質金屬蛋白7(MMP-7)

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格：>97.5%,BR二氫丹參I

臭曲霉Aspergillus│foetidus 質量規格：2,000-5,000 units/mg，進分丹參I

曲霉Aspergillus│oryzae 質量規格：>98%,BR丹參IIA-磺鈉
BTK抑制劑(Acalabrutinib)貴州綠僵 4-羥信號3A

粘蓋牛肝* 1-基-4-(二甲氨基)吡啶四氟鹽信號轉導分子7

雞傷門氏順式-1-溴-1-烯性別決定區Y框蛋白9

大腸埃希氏 2-氨基-5-溴-3-甲氧基吡性結合球蛋白

柿盤多毛孢二乙基亞磷酰胸腺活化調節趨化因子

Albidiferax 4-溴芐胸腺β4

南方鹽單胞 3-氨基-5-溴-2-吡啶

維羅納假單胞 2,7-二叔丁基芴雄

大腸埃希氏 Proparacaine HCl雄受體

松口蘑 4-基-4'-基聯苯雄烯二酮

枯草芽孢桿 4'-乙基-4-聯二苯溴脫氧核

2,2'-二氨基二苯硫血管活性腸肽

紫紅曲霉（±）-樟腦-10-磺血管緊張1-7

植物乳桿植物亞種 3-乙基苯血管緊張Ⅱ受體1

高溫放線科未定屬 4-溴異苯血管緊張Ⅱ受體1抗體
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)