細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：大鼠肺泡巨噬細胞    

產品英文：NR8383

貨號：FS-01X9720

細胞培養條件：F12K+15%FBS+1% L-氨酰胺+1%P/S

生長狀態：懸浮+貼壁（少量）生長

產品規格：1×106

單位：T25/瓶

是否提供細胞STR鑒定：不提供STR鑒定報告

保存培養溫度（℃）37

運輸溫度（℃）：常溫   

細胞培養的優點：

注意事項：

人促甲狀腺釋放(TRH)ELISA試劑盒英文名稱：Human growth hormone releasing hormone，GHRH ELISA Kit規格:96T/48T

人褪黑(MT)ELISA試劑盒英文名稱：Human Melatonin，MT ELISA Kit規格:96T/48T

人血栓B2(TXB2)ELISA試劑盒英文名稱：Human Thromboxane B2，TX-B2 ELISA Kit規格:96T/48T

人皮質/腎上腺(CORT)ELISA試劑盒英文名稱：Human Corticosterone，CORT ELISA Kit規格:96T/48T

人前列腺E2(PGE2)ELISA試劑盒英文名稱：Human Prostaglandin E2，PG-E2 ELISA Kit規格:96T/48T

人雙氫睪(DHT)ELISA試劑盒英文名稱：Human Dihydrotestosterone，DHT ELISA Kit規格:96T/48T

人促生長釋放(GHRH)ELISA試劑盒英文名稱：Human growth hormone releasing hormone，GHRH ELISA Kit規格:96T/48T

人雌(E)ELISA試劑盒英文名稱：Human estrogen，E ELISA Kit規格:96T/48T

人孕/孕(PROG)ELISA試劑盒英文名稱：Human Progesterone，PROG ELISA Kit規格:96T/48T

人超敏游離雌三(uE3)ELISA試劑盒英文名稱：Human ultra Estriol，uE3 ELISA Kit 規格:96T/48T

人去甲腎上腺(NA) ELISA試劑盒英文名稱：human Noradrenaline，NA ELISA Kit規格:96T/48T

人前列腺F(PGF)ELISA試劑盒英文名稱：human Prostaglandin F，PG-F ELISA Kit規格:96T/48T

人前列腺E1(PGE1)ELISA試劑盒英文名稱：human Prostaglandin E1，PG-E1 ELISA Kit規格:96T/48T

人內皮1(ET-1)ELISA試劑盒英文名稱：human Endothelin 1，ET-1 ELISA Kit 規格:96T/48T

人促卵泡(FSH)ELISA試劑盒英文名稱：Human follicle-stimulating hormone，FSH ELISA Kit 規格:96T/48T

人游離β絨毛膜促性腺(f-βhCG)ELISA試劑盒英文名稱：human free chorionic gonadotropin，f-βhCG ELISA Kit規格:96T/48T

人降鈣(CT)ELISA試劑盒英文名稱：Human Calcitonin，CT ELISA Kit規格:96T/48T

人促甲狀腺(TSH)ELISA試劑盒英文名稱：Human Thyroid Stimulating Hormone，TSH ELISA Kit 規格:96T/48T
大鼠肺泡巨噬細胞SULT1A1  芳基磺基轉移1抗體規格: 0.2ml

TKTL1  基移換樣蛋白1抗體規格: 0.2ml

PRSS10/TMPRSS2  蛋白10抗體規格: 0.2ml

TMPRSS4  膜型蛋白2抗體規格: 0.2ml

UEVLD/UEV3  泛結合E2樣蛋白抗體規格: 0.2ml

UPP1/Uridine Phosphorylase 1  核磷化1抗體規格: 0.2ml

ACPT  睪丸性磷抗體規格: 0.2ml

BRD8  甲狀腺受體共激活蛋白抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。