細胞培養操作規程：

一．培養基及培養凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優質胎牛血清，10%。

2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

產品屬于：

產品名稱：腎小管上皮細胞    

產品規格：5×105

貨號：FS-01X9815

產品類型：原代細胞

單位：T25/瓶

提供細胞鑒定：提供免疫熒光鑒定報告

保存培養溫度（℃）：37

運輸溫度（℃）：常溫

細胞培養的優點：

注意事項：

小鼠組織蛋白去乙酰化(HD)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Histone Deacetylase,HD ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠雌三(E3)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Estriol,E3 ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠雄烯二(ASD)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Androstenedione,ASD ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠游離睪(F-TESTO)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Free Testoterone,F-TESTO ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠睪(T)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Testoterone,T ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠孕/孕(PROG)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse Progesterone,PROG ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand,sRANKL ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠降鈣(CT)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Calcitonin,CT ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠內皮1(ET-1)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠雌二(E2)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Estradiol,E2 ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠皮質(Cortisol)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Cortisol ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠促甲狀腺(TSH)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Thyroid Stimulating Hormone,TSH ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠甲基化(Methylase)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Methylase ELISA Kit 　規格:96T/48T

小鼠抗增殖細胞核抗原抗體(PCNA)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse proliferating cell nuclear antigen antibody,PCNA ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠脂蛋白脂(LPL)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse lipoprotein lipase,LPL ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠抗酒石性磷5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TRACP-5b ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠葡萄糖依賴性胰島釋放多(GIP)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Glucose-dependent insulin-releasing polypeptide,GIP ELISA Kit規格:96T/48T

小鼠糖原磷化同工II(GP-II)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Glycogen phosphorylase II,GP-II ELISA Kit規格:96T/48T
腎小管上皮細胞PARP4  多腺二磷多聚4抗體/多聚ADP-核糖聚合4規格: 0.2ml

DOCK1  細胞質分裂付出蛋白1抗體規格: 0.2ml

EDA2R/TNFRSF27  腫瘤壞死因子受體超家族成員27抗體規格: 0.2ml

EDG1/CD363/S1P1  內皮細胞分化鞘脂G蛋白偶聯受體1抗體規格: 0.2ml

FEM 1B  FEM1B抗體規格: 0.2ml

AIF  調亡誘導因子抗體規格: 0.1ml

BACH1/BRIP1  乳腺癌易感基因相互作用蛋白1抗體規格: 0.1ml

AIMP2  AIMP2抗體規格: 0.2ml
實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。