當前位置:上海撫生實業有限公司>>ELISA試劑盒實驗原理>>人ELISA試劑盒實驗原理>> 48T/96TIL-6人白介素6ELISA試劑盒實驗原理
ELISA方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。 但ELISA測定中影響因素較多,而且其操作中有一定的技術要求,在檢測過程中除正常反應外,有時常見到一些錯誤的結果。
引起ELISA測定錯誤結果的原因主要有:
①標本因素;
②試劑因素;
③操作因素。在實驗過程中請嚴格按照使用說明操作,必能得出準確的實驗結果,可提供免費技術咨詢服務!
產品名稱 | IL-6人白介素6ELISA試劑盒實驗原理 |
英文名稱 | Human Interleukin 6, IL-6 Elisa Kit |
貨號 | FS-H63272 |
公司“質量是企業是生命之源”,選購優勢如下:
1*抗體——、靈敏、特異
2操作——吸附均勻、吸附性好、空白值低、空底透明度高
3的優化方案——回收利用率高、可靠性強
4適用于體液、組織勻漿,細胞培養上清液、尿液等各種類型的樣本。
5可檢測指標齊全:生長因子、炎癥因子、脂肪因子、基質金屬蛋白酶等等?
樣本實驗前準備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(2)血漿:
應根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
(5)培養細胞
檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
(6)組織標本
切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
Thermoactinomyces│sp. 高溫放線菌屬Thermoactinomyces│sp.分離基物:高溫大曲曲塊凍干物安全等級:1904生長條件:55℃存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:98%
Hafnia│alvei 蜂房哈夫尼菌Hafnia│alvei凍干物安全等級:1模式菌株:no測定賴氨。CM0180生長條件:28-30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Bacillus mucilaginosus 膠凍樣芽孢桿菌Bacillus mucilaginosus凍干物安全等級:1模式菌株:no細菌肥料營養肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾 1.0L,pH7.0。[注] 培養芽孢桿菌時加入5mg MnSO4·H2O,則有利于產生芽孢。pH7.0。121℃,15min。生長條件:30℃,好氧存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Sphingomonas sanxanigenens 胞外多聚物鞘氨醇單胞菌Sphingomonas sanxanigenens形態菌體呈球狀至桿狀,單個、成對或呈短鏈狀排列,革蘭氏陰性。凍干物安全等級:1模式菌株:no黃原膠。CM0002生長條件:30℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Gibberella fujikuroi 藤倉赤霉Gibberella fujikuroi凍干物安全等級:1模式菌株:no產赤霉素。綜合PDA:馬鈴薯煮汁1000mL,磷二氫鉀 3g,鎂 1.5g,葡萄糖 20g,維生素B1 10mg,瓊脂 20g,pH自然。馬鈴薯煮液:200g馬鈴薯,去皮,切塊,放入蒸餾中煮沸30min,取濾液定容至1000mL,備用。121℃,15min。生長條件:28℃,好氧存儲條件:-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;定期移植法 純度:98%
Lactobacillus│sanfrancisco 舊金山乳桿菌Lactobacillus│sanfrancisco分離基物:稀奶油凍干物安全等級:1模式菌株:noCM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Lactobacillus│paracasei subsp. paracasei 副干酪乳桿菌副干酪亞種Lactobacillus│paracasei subsp. paracasei分離基物:益生菌品凍干物安全等級:1模式菌株:no發酵乳CM0006生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:98%
Vibrio│mimicus 擬態弧菌Vibrio│mimicus凍干物安全等級:1模式菌株:no研究、質量控制。CM0002生長條件:37℃存儲條件:真空冷凍干燥法 純度:99%
IL-6人白介素6ELISA試劑盒實驗原理羅斯-孟加拉霉素瓊脂人肝臟裂解物2,6-二-3-吡CCR-2/5(CC chemokine receptor 2/5) CC趨化因子受體2/5抗原
DEV nutrient agar for microbiology DEV營養瓊脂人肝臟星形裂解物2,6-二-3-吡CCL1/TCA3/I-309 嗜粒趨化蛋白CCL1抗原
DEV nutrient gelatin DEV營養明膠人心臟微血管內皮裂解物1,3-二溴-5-苯CCL5/RANTES(regulated on activation normal T cell expressed and secreted) 活化T表達和分泌的調節因子抗原
DEV tryptophan broth DEV色氨肉湯人主動脈內皮裂解物1,3-二溴-5-苯CCL4/MIP-1 Beta(Macrophage Inflammatory Protein 1 beta) 巨噬炎性蛋白1β抗原
Dextrose casein-peptone agar 葡萄糖酪蛋白瓊脂人主動脈平滑肌裂解物3-甲氧基氮雜環丁烷鹽鹽MIP3 Alpha/CCL20(Macrophage inflammatory ptotein 3 alpha) 巨噬炎性蛋白3α抗原
DHL agar acc.to SAKAZAKI 甲基吡硫化氫乳糖瓊脂人心肌裂解物3-甲氧基氮雜環丁烷鹽鹽CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核趨化蛋白5抗原
DIASALM acc.to VAN NETTEN and VAN der ZEE DIASALM培養基人心肌-裂解物3-甲氧基氮雜環丁烷鹽鹽CCL14/HCC-1(C-C motif chemokine 14) 嗜粒趨化蛋白14抗原
DCA agar acc.to Weenk et al 梭狀芽孢桿菌鑒別瓊脂人心臟成纖維裂解物四正辛基溴化銨ABCD-1/CCL22 嗜粒趨化蛋白22抗原
操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數據處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準
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