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KGA和GAC抑制劑(CB-839)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-18 11:01:32瀏覽次數:166次

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中文名稱:KGA和GAC抑制劑(CB-839)

英文名稱:CB-839

產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10290

產品介紹:

英文名稱:CB-839

產品規格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

CB-839是一種高效的KGA和GAC的抑制劑,對重組GAC的IC50值小于15nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:1439399-58-2

純度:99.69%

分子量:571.57

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

根瘤菌腦蛋白9抗體Human PAEP(Glycodelin) 一氧化氮(NO)

馬腺疫鏈球菌獸疫亞種絲裂原誘導蛋白2抗體Human PROX1 葉受體α(FOLR1)

解淀粉芽孢桿菌鋅指蛋白393抗體Human PRPF19 葉受體(FOLR)

枯草芽孢桿菌組蛋白賴特異性脫甲基1抗體Human PROSC 葉(FA)

扣囊復膜孢酵母驅動蛋白樣蛋白1抗體(甲狀腺激受體相互作用蛋白5)Human PRPF3 氧化型(GSSG)

宇佐美曲霉組蛋白甲基化KMT3B抗體(雄激受體激活蛋白)Human ZNF335(Zinc finger protein 335) 氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)

黑曲霉離子通道蛋白Kv4.3抗體Human PRPF40A 氧化高密度脂蛋白(Ox-HDL)

枯草芽胞桿菌Killin-p53調節復制抑制蛋白抗體Human PRKX 氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)

盔狀畢赤酵母賴tRNA的連接抗體Human PRMT1 氧化低密度脂蛋白(OxLDL)

大腸埃希菌220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體Human PRPF40B 氧還原蛋白過氧化物4(PRDX4)

嗜冷生孢八疊球菌磷化220kDa蛋白激D相互作用蛋白抗體Human PRPF6 延伸蛋白A(EloA)

發根土壤桿菌(發根植物單胞菌)(現1)基爾曼氏細小病VP1/VP2抗體(大鼠潛在病KRV)C端Human PRMT5(Protein arginine N-methyltransferase 5) 煙酰腺二核磷(NADPH)

灰毛青霉離子通道蛋白家族KCNQ1抗體Human PRMT8 煙酰腺二核(NAD)

褐黃木耳(琥珀木耳)組蛋白H3 K9甲基轉移抗體Human PRMT3 牙骨質蛋白1(CEMP-1)

Paenibacillus thailandensis生物鐘KAT13D蛋白抗體Human PRMT6 牙本質基質蛋白1(DMP1)

柄籃狀菌Kelch樣蛋白36抗體Human PRPF40A 循環免疫復合物(CIC)

長根小奧德蘑Xerula│radicata (Relhan) Dörfelt 質量規格:>99.0%(GC)(R型)人參皂Rh1

人蒼白桿菌Ochrobactrum│anthropi 質量規格:>98.0%(GC)酪

多粘芽孢桿菌Bacillus│polymyxa 質量規格:用于薄層色譜顯色劑DL-薄荷
KGA和GAC抑制劑(CB-839)尖孢鐮孢 3,3'-二甲基-4,4'-二氨基二環己烷(異構體的混合物)半乳糖凝集9

Cupriavidus 6-基-2-吡高遷移率族蛋白1

棲土梭孢殼 椰子油二乙酰去乙酰化Sirtuin-2

蘇云金芽孢桿松躅亞種 4,6-二-2-甲基-3-吡啶羧乙酯煙酰腺二核;氧化型輔Ⅰ

矩圓黑盤孢 硅鋅果糖-1,6-二磷酯

嗜麥芽糖寡養單胞 C12-14-烷基縮水甘油水痘帶狀皰疹病gE

枯斑擬盤多毛孢 乙基香蘭縮(含異構體)卵清蛋白特異性IgA抗體

地衣芽胞桿 麥芽酯Toll樣受體1

環發仙 乙基香蘭縮(含異構體)速激肽3

擬無枝 香蘭縮CXC趨化因子配體6

產黃青霉 二苯甲基硫代乙酰β2糖蛋白I

費氏中華根瘤 N-甲基-2-甲氧基芐血清淀粉樣蛋白A3

聚多曲霉 3-氨基環己多巴脫羧

維氏氣單胞 二乙苯二(異構體混合物)抗中性粒;中心體抗體

塔賓曲霉 2,2,4-基-1,3-戊二二異丁酯α-羥丁脫氫

 


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