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貨號	FS-X10876

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：polo-like kinase1(PLK1)抑制劑（TAK-960）

英文名稱：TAK-960

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10876

產品介紹:

TAK-960是一種有效的，選擇性的polo-like kinase1(PLK1)抑制劑，在3μM ATP的條件下，IC50值為1.5nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1137868-52-0

純度：99.22%

分子量：561.6

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

戊糖片球菌*大鼠堿性成纖維生長因子Anti-S0A3 Antibody人凝血(TM)

羅伊氏乳桿菌小鼠補體片斷3aAnti-S0A7L2 Antibody人Ⅶ(FⅦ)

熱噬淀粉芽孢桿菌人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體Anti-S1PR1 Antibody人Ⅶ(FⅦ)

枯草芽孢桿菌大鼠巨噬炎癥蛋白5Anti-S0Z Antibody人可溶性白抗原G(sHLA-G)

白黃小脆柄菇小鼠17羥孕Anti-SAA4 Antibody人可溶性白抗原G(sHLA-G)

假木豆根瘤菌人抗Sa抗體Anti-S1PR4 Antibody人凝血原(PT)

土星漢遜酵母人抗神經元核抗體2型/抗Ri抗體Anti-SAE1 Antibody人凝血原(PT)

(蠟狀芽胞桿菌)小鼠間粘附分子1Anti-SAR1B Antibody人補體因子D(CFD)

天藍色鏈霉菌小鼠卵泡抑Anti-SCAF1 Antibody人補體因子D(CFD)

粘紅酵母大鼠可溶性血管粘附分子1Anti-Sam 68 Antibody人血漿纖維連接蛋白(pFN)

淺黃小孢絲鏈霉菌人異質型核糖核蛋白復合物/抗RA33抗體Anti-SARNP Antibody人血漿纖維連接蛋白(pFN)

彎孢菌小鼠組織蛋白去乙酰化Anti-SAMHD1 Antibody人纖維連接蛋白(cFn)

釀酒酵母人抗Q熱抗體Anti-SCAF4 Antibody人纖維連接蛋白(cFn)

藤黃節桿菌小鼠雌三Anti-SCAF4 Antibody人總蛋白S(TPS)

巨大芽孢桿菌大鼠免疫球蛋白AAnti-SCAMP1 Antibody人總蛋白S(TPS)

肉褐鱗環柄菇小鼠雄烯二Anti-SCAF4 Antibody人血清剝奪反應相關蛋白(SDPR)

硫氧還蛋白5抗體蟬花1-4（蟬擬青霉）（斜面）抗人微管a蛋白單抗7

轉錄因子Tbx18抗體裂殖酵母抗人TATA框結合蛋白交互作用蛋白單抗7

糖皮質激誘導腫瘤壞死因子受體抗體茄腐鐮刀菌抗人轉鐵蛋白單抗7

胸腺基質淋巴細胞生成-1抗體人厚垣普奇尼亞菌抗人肝癌單抗F117
polo-like kinase1(PLK1)抑制劑（TAK-960）枯草芽孢桿 N-叔丁氧羰基-O-芐基-L-蘇胰蛋白

聚多曲霉 6-溴-2-萘成纖維生長因子

黑曲霉酞菁鉛戊型肝炎

香菇 (1R,2S,5R)-(-)-薄荷基 (S)-p-甲苯亞磺酯巴氏桿

大腸埃希 (S)-(+)-2-氨基-4-溴丁氫鹽瘟病抗原

橘青霉 2,6-二氟吡啶胰蛋白

波蘭青霉 3-氨基組織金屬蛋白抑制因子2

細孢毛霉 1,3-二甲氧基苯胰島樣生長因子結合蛋白7

枯草芽孢桿 1,1-二甲基-2-苯基乙乙酯肝型脂肪結合蛋白

綠色木霉 2,3-二溴酰中性粒明膠相關脂質運載蛋白2

無托品酰白介5

葡萄座腔 N,N'-二苯基乙二垂體中葉

枯草芽孢桿二芐基二硫卵泡抑

異常威克漢姆酵母 3-苯基-2-炔-1-傳染性胃腸炎病IgG抗體

葡萄汁酵母 (+)-5,6-O-異亞基-L-抗壞血糖聚糖
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)