實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
格:48T/96T。
小鼠補(bǔ)體片斷5a(C5a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠過敏素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠黑色素細(xì)胞抗體(MCAb)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒AMAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠胰淀素(Amylin)ELISA試劑盒AmylinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠低氧誘導(dǎo)因子1α(HIF-1α)ELISA試劑盒ANAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠可溶性白細(xì)胞分化抗原86(B7-2/sCD86)ELISA試劑盒ANAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒ANAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒ANFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒ANFELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠丙二醛(MDA)ELISA試劑盒ANG-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒ANG-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血管緊張素原(aGT)ELISA試劑盒ANG-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)ELISA試劑盒ANG-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA試劑盒ANG-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠α1性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒ANG-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒ANG-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒ANG-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒ANG-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒ANG-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA試劑盒ANG-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗中性粒細(xì)胞核周抗體(pANCA)ELISA試劑盒ANG-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維性蛋白(GFAP)ELISA試劑盒ANG-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒Ang-ⅠELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠抗內(nèi)膜抗體(EMAb)ELISA試劑盒Ang-ⅠELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1IgA/G/M)ELISA試劑盒Ang-ⅠELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒ANG-
水痘-帶狀皰疹病毒核酸檢測(cè)試劑盒人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)ELISA試劑盒TIMP-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人C多肽(CP)ELISA試劑盒TIMP-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人γ谷氨酰轉(zhuǎn)移酶(GGT)ELISA試劑盒TIMP-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人癌胚鐵蛋白(CEF)ELISA試劑盒TIMP-1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人本周蛋白(BJP)ELISA試劑盒TIMP-2ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人變腎上腺素(MN)ELISA試劑盒TIMP-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人垂草扁桃(VMA)ELISA試劑盒TIMP-2ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

人高香草(HVA)ELISA試劑盒TIMP-3ELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。