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PCR的反應條件:
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小,設定25~30個循環。
如果循環次數太少,擴增量不足;如果循環次數太多,則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設定30秒~1分鐘;當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產物;Anneal溫度太低時,容易發生非特異性反應。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優成;而Extension時間太長時,會出現Smear。?
參數規格:
產品名稱:登革熱病毒2型(DFV-II)核酸檢測試劑盒
產品規格:50T
產品貨號:FS-P10495
產品分類:熒光PCR法
產品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產品特點:
本產品就是根據保守區設計引物而開發的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據你的模板鏈設計。因此,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執行擴增。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產物被固相板上特異的探針所結合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結合物,最終酶使底物顯色。常規的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內標,作出標準曲線,也可實現定量檢測目的。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
-749℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
A133培養基: 0012模式菌株: no種屬: Streptomyces│lavendulae提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
香菇培養基: 0014質緊濃香型,食用、藥用提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結法;礦物油法;定期移植法
雞腿168生長條件: 25培養基: 14提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
鏈霉菌培養基: 12模式菌株: no表面土壤提供形式: 其他安全等級: 1生長條件: 28℃ 其他
土曲霉生長條件: 25-28℃培養基: 0014提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no
鏈霉菌屬菌種抗真菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養基: CM0027生長條件: 28C
-750℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
十字花科黑脛菌培養基: CM0014模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 26C -80℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
黑曲霉培養基: CM0013產檸檬。提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 35℃ 礦物油法
耐堿納西桿菌培養基: 820模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 真空冷凍干燥法
針葉樹散斑殼培養基: 14模式菌株: no針葉病斑提供形式: 斜面培養物安全等級: 1生長條件: 25-27 定期移植法
卡那霉素鏈霉菌培養基: CM0411產生Kanamycin卡那霉素提供形式: 斜面培養物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥
=ATCC7256培養基: 0002模式菌株: no種屬: Enterobacter│cloacae提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
-751℃冰箱凍結;真空冷凍干燥
惡臭假單胞菌生長條件: 30℃培養基: 0002提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
2-甲基吡咯烷 四二酐 2--3-甲基噻吩
1-BOC-3-羥甲基 5-羥色胺肌酐鹽一水合物 4-(4-硝基芐基)
3-基甲酯 3,3',4,4'-聯四羧二酐 2,2':6',2''-三聯
3-甲酰基吲哚-1-羧 T-丁基酯 2,2':6',2''-三聯 2-硫脲嘧啶
Trifluralin 樂靈 1582-09-8
1-Decyne 1-癸炔 764-93-2
5-Phenylcarbamoylamino-1,2,3-thiadiazole 噻隆 51707-55-2
SODIUM CHOLATE HYDRATE, BIOCHEMIKA, >= 9 膽鈉 206986-87-0
大鼠孕酮受體(PROGR)ELISA試劑盒 ,英文名: PROGR ELISA Kit
人抗內皮抗體(AECA)ELISA檢測試劑盒Humanai-endothelialcellaibody,AECAELISAKit 96T/48T
大鼠白介素23(IL-23)免疫試劑盒 Rat Ierleukin 23,IL-23 ELISA Kit
CLIAKitfoFPIHumaissuefactorpathwayinhibitorELISAKit人組織因子途徑抑制物規格:48T/96T
人體CyclinA1基因甲基化檢測試劑盒20次
ELISAKitAFA人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體規格:48T/96T
登革熱病毒2型(DFV-II)核酸檢測試劑盒鹽黃柏104112-82-5中文別名:黃柏鹽鹽
英文名:Phellodendrine chloride
登錄號:104112-82-5
分子式:C20H24NO4Cl
分子量:377.85
分子結構:
外觀:白色結晶
規格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:川黃柏來源于蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchineseSchneid.的干燥樹皮
熔點:249-251℃
藥理藥效:清熱燥濕,瀉火除蒸,解療瘡。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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