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DNA甲基化抑制劑

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-18 11:04:13瀏覽次數:197次

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貨號 FS-X10296
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NR1/NMDAR1/FITC 熒光標記谷氨受體1抗體IgG正戊烷 農殘級
Phospho-NMDAR1 (Ser890)/FITC 熒光標記化谷氨受體1抗體IgG紅鋁溶液 70 wt%苯溶液
Phospho-NMDAR1 (Ser896) /FI

中文名稱:DNA甲基化抑制劑

英文名稱:5-Azacytidine

產品規格:1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg

貨號:FS-X10296

產品介紹:

英文名稱:5-Azacytidine

產品規格:1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg

5-Azacytidine是一種胞苷類似物,通過限制DNA甲基轉移酶來抑制DNA甲基化。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:320-67-2

別名:Ladakamycin;5-AzaC;Azacitidine

純度:98.24%

分子量:244.2

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

橢圓釀酒酵母抗體Human PPIL6 血管內皮粘附分子1(VCAM-1)

空泡鹽紅菌激肽釋放7抗體Human PPAT 血管內皮生長因子受體3(VEGFR-3/Flt-4)

黑曲霉激肽釋放9抗體(舒血管9)Human PPM1A 血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/Flk-1)

大腸埃希菌激肽釋放14抗體Human PPCS 血管內皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)

側孢短芽胞桿菌電壓閥門通道混合器相關亞家族成員7抗體Human PPEF1 血管內皮生長因子受體1(VEGFR1)

淡紫擬青霉ATP敏感性通道亞基kir6.2抗體Human PPM1B 血管內皮生長因子E(VEGF-E)

小平菇(秀珍菇)TIP60抗體Human PPM1F 血管內皮生長因子D(VEGF-D)

根瘤菌組蛋白賴特異性脫甲基1抗體Human PPP1CB 血管內皮生長因子C(VEGF-C)

豌豆根瘤菌轉錄因子GATA3結合蛋白G3B抗體Human PPM1G 血管內皮生長因子B(VEGF-B)

大腸桿菌磷化周期蛋白依賴激抑制因子1C抗體Human PPID 血管內皮生長因子A(VEGF-A)

吸水鏈霉菌磷化通道蛋白DRK1抗體Human POU3F3 血管內皮生長因子(VEGF165)

熱帶假絲酵母離子通道蛋白Kv3.4抗體Human POLR3A 血管內皮生長因子(VEGF)

頂孢頭孢霉離子通道蛋白Kv3.3抗體Human POLR3D 血管內皮生長因子受體3(VEGFR3/Flt4)

鐘器腐霉組蛋白去甲基化JMJD2B抗體Human POLR3B 血管內皮生長因子受體1(VEGFR-1/Flt1)

嗜熱脂環芽胞桿菌肝果糖激抗體Human POU3F4 血管內皮生長因子121(VEGF121)

鬼傘脊柱側后凸畸形肽抗體Human POU4F2 血管內皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)

植物乳桿菌Lactobacillus│plantarum 質量規格:>99.0%(GC)續隨二萜

ATCC700850=DSM11927資源名稱: 方形鹽盒菌 質量規格:>98.0%(HPLC)(T)

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質量規格:>99.0%(GC)(T)石榴皮鞣
DNA甲基化抑制劑密叢毛霉 α,α-二乙酯脂肪甘油三酯脂

膠孢 1-芐基海因胱天蛋白1

籬邊粘褶 七氟異基活化受體樣激1

叢毛紅曲 4-乙氧基苯乙肝

墻支頂孢 2,5-二煙甲酯脫2

酵母 吲唑-4-羧脂肪酰水解1

食屬 7-羧基-1H-吲唑單酰基甘油酯

假委內瑞拉鏈霉 基氧膦N-乙酰天門冬

釀酒酵母 1-芐基-4-甲角蛋白18

薄層桿 3-基-4-氟甲酯氫ATP

弗吉尼亞鏈霉 2,3,5-三氟苯甲煙酰

Microbacterium halotolerans 6--咪唑并[1,2-b]吡-3-甲乙酯趨化

芽孢桿屬 1-甲基-5-硝基-1H-甲殼質蛋白40

白僵 4-丁縮二甲半胱蛋白11

奇異球 環丁半胱蛋白1β

 


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