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當前位置：上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>抑制劑激活劑>> PI3Kα和PI3Kδ抑制劑(AZD-8835)
| 貨號 | FS-X10955 |
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產品介紹:
AZD8835是一種有效的選擇性PI3Kα和PI3Kδ抑制劑，IC50分別為6.2和5.7nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ 號：1620576-64-8 純度：98.61% 分子量：469.54 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
英文名稱：AZD-8835
產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號：FS-X10955
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
少根根霉人表面膜免疫球蛋白MBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠T活化連接蛋白(LAT)
大腸埃希菌人表面膜免疫球蛋白DBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗內膜抗體(EMAb)
地衣芽孢桿菌人殺傷免疫球蛋白樣受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗內膜抗體(EMAb)
假單胞菌屬人殺傷凝集樣受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)
昆明漢納酵母人活化蛋白CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)
小青霉人蛋白CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)
香菇屬人血小板因子3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)
芽孢桿菌屬人凝血原片段F1+2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠神經膠質纖維性蛋白(GFAP)
大腸埃希菌人甘露糖結合蛋白/甘露糖結合凝集Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠神經膠質纖維性蛋白(GFAP)
蠟狀芽孢桿菌人膜攻擊復合物Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗中性粒核周抗體(pANCA)
蘋果人優球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠抗中性粒核周抗體(pANCA)
Mobilicoccus人游離血紅蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
木霉人1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)
淡黃木霉 人一氧化碳血紅蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
嗜幾丁質類芽孢桿菌人血小板相關免疫球蛋白Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠15脂加氧(15-LO/LOX)
潮間交替紅色桿菌人血小板相關補體3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β干擾(IFN-β/IFNB)
鋅指蛋白598抗體硬柄小皮傘家貓肺細胞
鋅指脂蛋白-1b抗體白環粘奧德蘑大額牛腎細胞
調節蛋白1抗體毛木耳恒河猴皮膚細胞
鋅指/環指蛋白1抗體潔麗香菇綿羊皮膚細胞
PI3Kα和PI3Kδ抑制劑(AZD-8835)釀酒酵母 化亞錫一氧化氮
芽孢桿 化鎳誘導型NO合
蘋果黑腐皮殼 化鎂幾丁質
尕海湯飛凡 化組織蛋白H
鐵鉆土鏈霉 線粒體促凋亡蛋白
披發糖多孢披發亞種 化亞銅半胱蛋白3
釀酒酵母 無水化鋰核內切G
向日葵鏈格孢 化鋰抗凋亡因子
涅氏短狀桿 化鈷轉化因子2
猴頭菇 無水化鈣彈性蛋白
香菇（可訂購） 化鈣鎖鏈
費氏中華根瘤 二叉頭框蛋白01
鹽古桿 正辛補體片段2a
香菇 3,5-二甲補體片段3b
相思根瘤 磺基水楊鈉補體片斷3a
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