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貨號	FS-X10940

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：DUB抑制劑(PR-619)

英文名稱：PR-619

產品規格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10940

產品介紹:

PR-619是一種DUB抑制劑，作用于USP4，USP8，USP7，USP2和USP5，EC50分別為3.93，4.9，6.86，7.2和8.61μM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：2645-32-1

別名：2,6-Diamino-3,5-dithiocyanopyridine

純度：98.07%

分子量：223.28

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

蠟樣芽孢桿菌人心肌特異性肌鈣蛋白TBacillus pumilus小鼠神經營養因子4(NT-4)

枯草芽孢桿菌人肌球蛋白重鏈Bacillus pumilus小鼠骨保護(OPG)

頂孢頭孢霉人熱休克蛋白27Bacillus pumilus小鼠骨保護(OPG)

釀酒酵母人血管抑/血管穩定蛋白Bacillus pumilus小鼠B因子(BF)

鏈霉菌人心型脂肪結合蛋白Bacillus pumilus小鼠B因子(BF)

中國臺灣皮斯克氏酵母人腦型脂肪結合蛋白Bacillus pumilus小鼠抑瘤M(OSM)

芽胞桿菌人血管舒緩激肽Bacillus pumilus小鼠抑瘤M(OSM)

膜醭畢赤酵母人肌球蛋白輕鏈Bacillus pumilus小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)

假單胞菌人α-輔肌動蛋白3Bacillus pumilus小鼠血小板衍生生長因子可溶性受體α(PDGFsR-α)

釀酒酵母人超敏C反應蛋白Bacillus pumilus小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)

金福菇人肌鈣蛋白ⅠBacillus pumilus小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)

瓜亡革菌人血清淀粉樣蛋白ABacillus pumilus小鼠P選擇(P-Selectin/CD62P)

奧氏蜜環菌人熱休克蛋白60Bacillus pumilus小鼠P選擇(P-Selectin/CD62P)

雞傷門氏菌人熱休克蛋白糖蛋白96Bacillus pumilus小鼠L解(PAL)

金針菇（毛柄金錢菌、冬菇）人心肌營養1Bacillus pumilus小鼠L解(PAL)

枯草芽孢桿菌人銅藍蛋白Bacillus pumilus小鼠可溶性CD30配體(sCD30L)

鋅指蛋白131抗體大麗輪枝孢人心肌細胞

鋅指蛋白449抗體楊生盾殼霉小鼠單核巨噬細胞白血病細胞

鋅指蛋白346抗體尖孢鐮刀菌古巴專化型人皮膚成纖維細胞

鋅指蛋白532抗體荔枝霜疫霉人肝星狀細胞
DUB抑制劑(PR-619)暗產色鏈霉磷二氫縮

短波單胞對稱二苯硫脲氨肽N

黃海克錫勒氏烯基硫脲乳脫氫

枯草芽孢桿伍德合金肌酐

釀酒酵母第威德合金谷氨基轉移

釀酒酵母銀deta6去飽和

產堿假單胞硅鋁deta5去飽和

芬萊氏鏈霉磷鋁deta9去飽和

靈芝屬活性氧化鋁7-乙氧基異吩惡唑酮脫乙基

大腸桿活性氧化鋁S-腺甲硫

傷門氏乙銅s腺同型半胱

康寧木霉氧化亞銅糜蛋白

枯草芽孢桿化銅類固

仙臺鏈霉氫氧化銅17羥孕酮

釀酒酵母溴化銅促黃體生成
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)